2023年全國碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、鴨圓環(huán)病毒(DuCV)屬于圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬,可導致鴨的免疫抑制,對養鴨業(yè)造成危害。本研究通過(guò)DuCV ORF3的片段大小對DuCV進(jìn)行了基因型分類(lèi),并通過(guò)原核表達和真核表達對ORF3的功能進(jìn)行了研究。主要內容如下:
   ⑴鴨圓環(huán)病毒ORF3基因克隆測序及序列分析。為了解DuCV不同分離株的ORF3基因變異情況以及分析它們的同源性,本研究從臨床病料中對DuCV的ORF3基因進(jìn)行了克隆測序,結果獲得了10株DuCV的ORF3基

2、因序列,并與GenBank登錄的45株DuCV的ORF3基因進(jìn)行同源性分析,結果表明所有DuCV的ORF3基因根據大小及同源性差異分為兩個(gè)基因型:基因1型和基因2型。同一基因型之間的核苷酸同源性為95.8%~100%,氨基酸同源性為88.6%~100%,而不同基因型之間的核苷酸同源性?xún)H為87.8%~91.6%,氨基酸同源性?xún)H為72.2%~81.0%。55個(gè)毒株中的36個(gè)屬于基因1型,ORF3基因大小為237bp,編碼78個(gè)氨基酸的蛋白;

3、19個(gè)毒株屬于基因2型,ORF3基因大小為297bp,編碼98個(gè)氨基酸的蛋白。本研究獲得的10株DuCV的ORF3基因9株屬于基因1型,1株屬于基因2型,說(shuō)明當前我國流行的DuCV主要為ORF3基因1型。
   ⑵鴨圓環(huán)病毒FJ0601株ORF3蛋白的原核表達及其抗血清制備。本研究采用PCR方法擴增出DuCV FJ0601株ORF3基因,將其克隆入原核表達載體pET-32a(+)中,構建了DuCV ORF3基因的原核表達質(zhì)粒pE

4、T-32a-ORF3,將其轉入宿主菌Rosetta(DE3)Plys中進(jìn)行誘導表達。SDS-PAGE電泳結果表明DuCV ORF3蛋白在大腸桿菌中得到了高效表達,Western-blotting檢測結果顯示,該蛋白作為抗原可以與DuCV的陽(yáng)性血清發(fā)生抗原抗體反應,從而首次證實(shí)了DuCV的ORF3為功能性基因,在DuCV感染宿主過(guò)程中進(jìn)行了表達。將原核表達的蛋白純化后免疫小鼠,制備了抗DuCV ORF3蛋白的血清,為后續研究奠定了基礎。<

5、br>   ⑶DuCV ORF3基因的真核表達。采用PCR方法擴增出DuCV FJ0601株的ORF3完整基因,并將其克隆到Bac-to-Bac桿狀病毒表達系統的桿狀病毒轉移載體pFastBacHT B中,獲得重組轉移載體pFast-ORF3,再將其轉化DH10Bac感受態(tài)細胞,發(fā)生轉座作用,通過(guò)藍白斑篩選獲得含有ORF3基因的重組桿狀病毒DNA,以脂質(zhì)體介導法將重組桿狀病毒DNA轉染Sf9昆蟲(chóng)細胞,獲得重組桿狀病毒Bacmid-OR

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