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    • 簡(jiǎn)介:1被稱(chēng)為卵磷脂的磷脂分子是()A磷脂酰膽堿B磷脂酰乙醇胺C磷脂酰絲氨酸D鞘氨醇2生物膜的各種成分中不屬于雙親性分子的是()A磷脂B膽固醇C跨膜蛋白D膜周邊蛋白3最簡(jiǎn)單的糖脂分子是()A腦苷脂B神經(jīng)節苷脂C單半乳糖基甘油二酯D三半乳糖基甘油二酯4人體中多數細胞膜,其脂類(lèi)與蛋白質(zhì)含量相比A脂類(lèi)含量高很多B蛋白質(zhì)含量高很多C脂類(lèi)和蛋白質(zhì)含量大致相等D僅含有脂類(lèi),不含有蛋白質(zhì)5最簡(jiǎn)單的磷酸甘油酯是()A磷脂酸B磷脂酰膽堿C磷脂酰乙醇胺D磷脂酰絲氨酸E鞘氨醇6生物膜是指()A細胞膜的另一種說(shuō)法B除線(xiàn)粒體膜以外的各種膜的總稱(chēng)C內膜系統的膜D細胞膜、細胞內膜和線(xiàn)粒體膜的總稱(chēng)7下列生物膜中蛋白質(zhì)/脂類(lèi)比值最大的是()A神經(jīng)髓鞘B人紅細胞膜C內質(zhì)網(wǎng)膜D線(xiàn)粒體外膜E線(xiàn)粒體內膜8下列膜脂分子在膜中含量最多的是()A磷脂酰膽堿B磷脂酰乙醇胺C磷脂酰絲氨酸D鞘磷脂9膜脂中最為重要的脂類(lèi)是()A脂肪酸()A是雙親媒性分子B跨膜區是Α螺旋或Β筒C可跨膜一次或多次D因為與膜的疏水區非共價(jià)結合,因此較容易去除19關(guān)于細胞膜上糖類(lèi)的不正確的敘述是()A質(zhì)膜中糖類(lèi)主要分布在膜的外表面B主要以糖蛋白和糖脂的形式存在C糖蛋白和糖脂上的低聚糖側鏈從膜的胞質(zhì)面伸出D糖蛋白中的糖鏈對蛋白質(zhì)及膜的性質(zhì)影響很大20脂錨定蛋白與脂雙層的結合是通過(guò)何種化學(xué)鍵實(shí)現的()A共價(jià)鍵B離子鍵C氫鍵D靜電作用21紅細胞中的血影蛋白是一種()A跨膜蛋白B膜周邊蛋白C脂錨定蛋白D以上都不是22膜周邊蛋白與脂雙層的結合通常不包括下列化學(xué)鍵中的()A共價(jià)鍵B離子鍵C氫鍵D靜電作用23下列膜蛋白中通過(guò)改變離子強度等較溫和的條件就能從膜上溶解下來(lái)的是()A跨膜蛋白B膜周邊蛋白C脂錨定蛋白D三種蛋白都很難從膜上去除24細胞膜有能量交換、物質(zhì)運輸、信息傳遞三種主要功能,這些功能與組成膜的哪種物質(zhì)有直接關(guān)系()A磷脂B糖類(lèi)C蛋白質(zhì)D膽固醇25被稱(chēng)為腦磷脂的磷脂分子是()A磷脂酰膽堿B磷脂酰乙醇胺C磷脂酰絲氨酸D鞘氨醇26磷脂酰膽堿多分布在細胞膜的()A在脂雙層的內外兩層大致相當B主要分布在脂雙層內層C主要分布在脂雙層外層
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    • 簡(jiǎn)介:細胞生物學(xué)研究中的激活劑和抑制劑細胞生物學(xué)研究中的激活劑和抑制劑ANANDIKADHALIWALPHDANANDIKADOTDHALIWALATGMAILDOTCOMRUTGERSUNIVERSITY,NEWJERSEY,UNITEDSTATES譯者譯者王秀英博士王秀英博士MARYATLABOMEDOTCOM美國新澤西州普林斯頓合原研究有限責任公司SYNATOMRESEARCHDOIHTTP//DXDOIORG/1013070/MMCN3185日期日期更新20131019原始版20130427引用引用實(shí)驗材料和方法20133185介紹介紹細胞生物學(xué)研究細胞結構、生理特性及細胞功能。它涉及到對細胞器、細胞與周?chē)h(huán)境間相互作用、生命周期、分化及死亡的研究。細胞生物學(xué)與遺傳學(xué)、分子生物學(xué)、發(fā)育生物學(xué)和生物化學(xué)等其它生物學(xué)領(lǐng)域是密切相關(guān)的。圖1真核細胞骨架。肌動(dòng)蛋白纖維顯示為紅色,微管為綠色,核為藍色。肌動(dòng)蛋白染色使用的是羅丹明鬼筆環(huán)肽,微管使用的是連接有ALEXA488的抗Α微管蛋白著(zhù)色劑,DNA則使用的是HOECHST染料。對于細胞生物學(xué)領(lǐng)域的研究者而言,為了更加全面地理解細胞的功能、細胞的信號傳遞以及控制細胞命運、功能及表型的胞內機制,抑制劑與激活劑是至關(guān)重要的研究工具。許多抑制劑和激活劑都被廣泛用于研究細胞動(dòng)力學(xué)及功能。這里我們對真核細胞中各種細胞生物學(xué)研究如細胞內吞、分泌、粘附、細胞骨架動(dòng)力學(xué)、內質(zhì)網(wǎng)和高爾基體研究中常用的抑蛋白ALDRICH綜合癥蛋白(WASP)家族成員)并抑制ARP2/3復合物的活化。該分子阻斷肌動(dòng)蛋白絲的組裝。同樣抑制PIP2誘導的肌動(dòng)蛋白聚合反應EC504ΜM。抑制依賴(lài)于肌動(dòng)蛋白的細胞功能(遷移、運輸、吞噬、內褶)。ALDRICH,TOCRISBIOSCIENCEMYCALOLIDEB(C52H74N4O17)肌動(dòng)蛋白它選擇性地將F肌動(dòng)蛋白徹底解聚成G肌動(dòng)蛋白。與肌動(dòng)蛋白以11的摩爾比進(jìn)行結合(KD1320NM)。溶于DMSO、甲醇或異丙醇。抑制肌動(dòng)球蛋白ATP酶。111213,SANTACRUZBIOTECHNOLOGY,ENZOLIFESCIENCENOCODAZOLE(C14H11N3O3S)微管抑制微管的動(dòng)態(tài)變化并促使微管解聚。與Β微管蛋白結合并阻止兩個(gè)鏈間二硫鍵中任意一個(gè)的形成。在DMSO的溶解度達10MG/ML。有絲分裂抑制劑。將細胞周期阻滯在G2/M期。抑制各種癌癥相關(guān)的激酶,包括ABL、CKIT、BRAF、MEK1、MEK2和MET。14151617,SIGMAALDRICH,TOCRISBIOSCIENCE,CELLSIGNALINGTECHNOLOGY,EMD4BIOSCIENCES長(cháng)春堿(C46H58N4O9H2SO4)微管解聚微管。與微管蛋白結合并誘導其自締形成螺旋形聚合體,抑制微管組裝。溶于水和甲醇。通過(guò)阻斷有絲分裂紡錘體的形成將細胞周期阻滯于G2/M期。在一些腫瘤細胞系中誘導凋亡。抑制自噬體的成熟。181619,SIGMAALDRICH,TOCRISBIOSCIENCE,EMD4BIOSCIENCES,SANTACRUZBIOTECHNOLOGY。秋水仙堿(C22H25NO6)微管與微管蛋白結合并阻止其聚合在乙醇中溶解度達50MG/ML,在水中溶解度可達100MM,DMSO中溶解度可達100MM。有絲分裂抑制劑。在一些正常的及癌癥細胞系中誘導凋亡202122,SIGMAALDRICH,TOCRISBIOSCIENCE,EMD4BIOSCIENCES長(cháng)春新堿(C46H56N4O10微管能與微管蛋白結合并抑制微管形成的吲哚生物溶于甲醇和水。延遲細胞周期的進(jìn)232425,SIGMAALDRICH,TOCRISBIOSCIENCE,
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    • 簡(jiǎn)介:本文格式為本文格式為WORD版,下載可任意編輯版,下載可任意編輯1細胞生物學(xué)和答案細胞生物學(xué)和答案安徽大學(xué)20062007學(xué)年第一學(xué)期細胞生物學(xué)考試試卷(A卷)一、名詞解釋題(每題3分,共30分)1.內膜系統(ENDOMEMBRANESYSTEM)指在布局、功能及發(fā)生上緊密相關(guān)的,由膜圍繞的細胞器或細胞布局,主要包括內質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、溶酶體、過(guò)氧化物酶體、核膜、胞內體和分泌泡等。2.驅動(dòng)蛋白KINESIN在神經(jīng)元突觸運輸中,察覺(jué)兩種馬達蛋白,其中驅動(dòng)蛋白可利用ATP水解釋放的能量向(+)極運輸小泡;而胞質(zhì)動(dòng)力蛋白那么驅動(dòng)向(-)極的運輸。3.CASPASE家族CASPASE活性位點(diǎn)是半胱氨酸CYSTEINE,裂解靶蛋白位點(diǎn)是天冬氨酸殘基后的肽鍵,因此稱(chēng)為CYSTEINEASPARTICACICSPECIFICPROTEASE,即CASPASE4.受體是一種能夠識別和選擇性結合某種配體(信號分子)的糖蛋白,當與配體結合后,通過(guò)信號轉導作用將胞外信號轉換為胞內化學(xué)或物理的信號,以啟動(dòng)一系列過(guò)程,最終表現為生物學(xué)效應。本文格式為本文格式為WORD版,下載可任意編輯版,下載可任意編輯3它彌漫整個(gè)細胞質(zhì)的空間,與外側的細胞膜和內側的核膜存在確定的布局聯(lián)系,以保持細胞特有的外形,并與細胞運動(dòng)有關(guān)。也可以這樣回復從廣義上講,細胞骨架包括細胞質(zhì)骨架、細胞核骨架、細胞膜骨架和細胞外基質(zhì)。從狹義上講,細胞骨架即為細胞質(zhì)骨架,包括微管、纖絲兩大類(lèi)纖維成分。細胞生物學(xué)試卷A卷共5頁(yè)第1頁(yè)二、填空題(每空1分,共20分)1.根據靶細胞上受體存在的部位,可將受體分為細胞內受體和細胞外觀(guān)受體。前者受胞外親脂性信號分子激活,主要代表為甾類(lèi)激素和甲狀激素;后者受胞外親水性,主要代表為神經(jīng)遞質(zhì)、生長(cháng)因子、局部化學(xué)遞質(zhì)和大多數激素。2.內質(zhì)網(wǎng)的特征酶是葡萄糖6磷酸酶、高爾基體的特征酶是糖基轉移酶、過(guò)氧化物酶的特征酶是尿酸氧化酶;3.細胞是由英國學(xué)者在1665年察覺(jué)的。細胞學(xué)說(shuō)是由德國的植物學(xué)家和動(dòng)物學(xué)家共同提出的。4.離子通道一般可分為電壓門(mén)通道;配體門(mén)通道;壓力激活通道3種類(lèi)型期合成的。6.小分子物質(zhì)的跨膜轉運主要有被動(dòng)運輸和主動(dòng)運
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    • 簡(jiǎn)介:細胞生物學(xué)課程論文題目線(xiàn)粒體通透性轉換與細胞凋亡線(xiàn)粒體通透性轉換與細胞凋亡的研究進(jìn)展的研究進(jìn)展班別學(xué)號姓名成績(jì)線(xiàn)粒體是細胞生命活動(dòng)控制中心,它不僅是細胞呼吸鏈和氧化磷酸化的中心,而且是細胞凋亡調控中心。研究表明細胞色素C從線(xiàn)粒體釋放是細胞凋亡的關(guān)鍵步驟”1。釋放到細胞質(zhì)中的細胞色素C在DATP存在的條件下能與凋亡蛋白酶活化因子1APOPTOSISPROTEASEACTIVATINGFACTORL,APAF一1結合¨1,使其形成多聚體,并促使半胱天冬蛋白酶與其結合形成凋亡小體APOPTOSOME,現已能確定半胱天冬蛋白酶即CASPASE在凋亡過(guò)程中是起著(zhù)必不可少的作用。細胞凋亡的過(guò)程實(shí)際上是CASPASE不可逆有限水解底物的級聯(lián)放大反應過(guò)程。目前,至少有10多種CASPASE被發(fā)現,CASPASE分子間的同源性很高,結構相似,都是半胱氨酸家族蛋白酶,根據功能可把CASPASE基本分為2類(lèi)一類(lèi)參與細胞的JJNR;另一類(lèi)參與細胞凋亡。CASPASE家族一般以酶原的形式存在,并具有半胱氨酸激活位點(diǎn)和底物裂解位點(diǎn)。細胞色素C在DATP存在的條件下與凋亡蛋白酶活化因子1APOPTOSISPROTEASEACTIVATINGFACTOR1,APAF一1結合形成的多聚體主要與CASPASE一9結合形成凋亡小體。其結果是CASPASE一9被激活,激活的CASPASE9能夠激活其他的CASPASE如CASPASE一3等,從而誘導凋亡。3.2線(xiàn)粒體釋放凋亡誘導因子凋亡誘導因子線(xiàn)粒體釋放凋亡誘導因子凋亡誘導因子AIFAPOPTOSISINDUCINGFACTOR,AIF是一種主要的凋亡效應蛋白,在體外它可以誘導染色質(zhì)凝聚以及DNA大規模片段化的形成。激光共聚焦熒光顯微鏡和電子顯微鏡觀(guān)察顯示,在正常的細胞內,AIF定位于線(xiàn)粒體,被線(xiàn)粒體外膜保留在膜間隙,并與熱休克蛋白60HEATSTOCKPROTEIN60,HSP60共同定位于線(xiàn)粒體,HSP60被線(xiàn)粒體內膜保留于基質(zhì)。當細胞受到誘導凋亡的刺激,如癌基因抑制藥物神經(jīng)酰胺等作用時(shí),AIF而不是HSP60由線(xiàn)粒體轉位至細胞核。這表明僅僅是線(xiàn)粒體外膜成為有通透性的蛋白。AIF由線(xiàn)粒體至細胞核的再分配,可以被BCL一2阻止,BCL一2特異性地保護線(xiàn)粒體膜穩定性,從而阻止AIF由線(xiàn)粒體轉位至細胞核。CASPASE的廣譜抑制物N一芐氧羰基一纈氨酸一丙氨酸一門(mén)冬氨酰氟甲基酮NBENZYLOXYCARBONYLVALALAASPFLUOROMETHYLKETONE,ZVAD.FMK不能阻止AIF的轉位。ATP的過(guò)度消耗可以引起AIF轉位至細胞核,神經(jīng)酰胺加速AIF的轉位。3.3線(xiàn)粒體釋放線(xiàn)粒體釋放SMACSMAC/DIABLODIABLOSMACSMACTHESECONDMITOCHONDRIADERIVEDACTIVATOROFCASPASE又稱(chēng)為DIABLODIRECTIAPBINDINGPROTEIN,是一種線(xiàn)粒體蛋白,能夠促進(jìn)細胞凋亡,它通過(guò)拮抗或中和一種或幾種凋亡抑制蛋白IAP家族成員而發(fā)揮其促凋亡作用¨0|。當細胞受到紫外線(xiàn)或1一射線(xiàn)照射時(shí),SMAC/DIABLO由線(xiàn)粒體進(jìn)入細胞質(zhì),SMAC/DIABLO的這種位移可被BCL一2抑制??梢?jiàn),BCL一2除了通過(guò)抑制細胞色素C的釋放來(lái)抑制凋亡以外,還可以通過(guò)抑制SMAC/DIABLO的位移而抑制凋亡。SMAC/DIABLO由線(xiàn)粒體移位至細胞質(zhì),依賴(lài)于細胞色素C的釋放,即首先細胞色素C從線(xiàn)粒體釋放至細胞質(zhì)。然后SMAC/DIABLO才從線(xiàn)粒體釋放,發(fā)生位移。與細胞色素
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    • 簡(jiǎn)介:第一章1細胞生物學(xué)在生命科學(xué)中所處的地位,以及它與其他學(xué)科的關(guān)系1)地位以細胞作為生命活動(dòng)的基本單位,探索生命活動(dòng)規律,核心問(wèn)題是將遺傳與發(fā)育在細胞水平上的結合。2)關(guān)系應用現代物理學(xué)與化學(xué)的技術(shù)成就和分子生物學(xué)的概念與方法,研究生命現象及其規律。1.根據細胞生物學(xué)研究的內容與你所掌握的生命科學(xué)知識,客觀(guān)、恰當地評價(jià)細胞生物學(xué)在生命科學(xué)中所處的地位,以及它與其他學(xué)科的關(guān)系。答細胞生物學(xué)是一門(mén)從細胞的顯微結構、超微結構和分子結構的各級水平研究細胞的結構與功能的關(guān)系,從而探索細胞生長(cháng)、發(fā)育、分化、繁殖、遺傳、變異、代謝、衰亡及進(jìn)化等各種生命現象規律的科學(xué)。生命體是多層次、非線(xiàn)性、多側面的復雜結構體系,而細胞是生命體的結構與生命活動(dòng)的基本單位,有了細胞才有完整的生命,一切生命現象的奧秘都要從細胞中尋找答案。許多高等學(xué)校在生命科學(xué)的教學(xué)中,將細胞生物學(xué)確定為基礎課程。細胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)和生態(tài)學(xué)并列為生命科學(xué)的四大基礎學(xué)科。細胞生物學(xué)與其他學(xué)科之間的交叉滲透日益明顯。2.通過(guò)學(xué)習細胞學(xué)發(fā)展簡(jiǎn)史,你如何認識細胞學(xué)說(shuō)的重要性答18381839年,德國植物學(xué)家施萊登和德國動(dòng)物學(xué)家施旺提出一切動(dòng)植物都由細胞發(fā)育而來(lái),并由細胞和細胞產(chǎn)物所構成;每個(gè)細胞作為相對獨立的單位,但也與其他細胞相互影響。1858年VIRCHOW對細胞學(xué)說(shuō)做了重要的補充,強調細胞只能來(lái)自細胞。細胞學(xué)說(shuō)的提出對于生物科學(xué)的發(fā)展具有重大意義。細胞學(xué)說(shuō)、進(jìn)化論、孟德?tīng)栠z傳學(xué)稱(chēng)為現代生物學(xué)的三大基石,而細胞學(xué)說(shuō)又是后二者的基石。對細胞結構的了解是生物科學(xué)和醫學(xué)分支進(jìn)一步發(fā)展所不可缺少的。3.試簡(jiǎn)明扼要地分析細胞生物學(xué)學(xué)科形成的客觀(guān)條件,以及它今后發(fā)展的主要趨勢。答(1)細胞生物學(xué)學(xué)科形成的客觀(guān)條件細胞的發(fā)現(16651674)1665年,胡克發(fā)表了顯微圖譜(MICROGRAPHIA)一書(shū),描述了用自制的顯微鏡(30倍)觀(guān)察櫟樹(shù)軟木塞切片時(shí)發(fā)現其中有許多小室,狀如蜂窩,稱(chēng)為“CELLAR”。1674年,荷蘭布商列文虎克自制了高倍顯微鏡(300倍左右),觀(guān)察到血細胞、池塘水滴中的原生動(dòng)物、人類(lèi)和其他哺乳動(dòng)物的精子。細胞學(xué)說(shuō)的建立(18381858)18381839年,德國植物學(xué)家施萊登和德國動(dòng)物學(xué)家施旺兩人共同提出細胞學(xué)說(shuō),1858年VIRCHOW對細胞學(xué)說(shuō)進(jìn)行了補充。細胞學(xué)的經(jīng)典時(shí)期各種主要的細胞分裂形式和細胞器被相繼發(fā)現,構成了細胞學(xué)的經(jīng)典時(shí)期。(2)細胞生物學(xué)與分子生物學(xué)包括分子遺傳學(xué)與生物化學(xué)相互滲透與交融是總的發(fā)展趨勢。4當前細胞生物學(xué)研究的熱點(diǎn)課題中你最感興趣的是哪些為什么染色體DNA與非組蛋白的相互作用關(guān)系細胞增殖、分化、凋亡的相互關(guān)系及其調控細胞信號轉導研究細胞結構體系的裝配第二章RNA在核中合成和加工蛋白質(zhì)在細胞質(zhì)中合成細胞分裂二分或出芽有絲分裂或減數分裂內膜無(wú)獨立的內膜有,分化成細胞器細胞骨架無(wú)普遍存在呼吸作用和光合作用酶的分部質(zhì)膜線(xiàn)粒體和葉綠體(植物)核糖體70S(50S+30S)80S(60S+40S)5細胞的結構與功能相關(guān)是細胞生物學(xué)的一個(gè)基本原則,你能否提出更多的論據來(lái)說(shuō)明之答成熟紅細胞喪失了細胞核,卻含有很多血紅蛋白,細胞呈雙面凹的圓餅狀,它不需分裂﹑分化,所以可以無(wú)細胞核;血紅蛋白多及其圓餅狀形狀(相對表面積大,有助于物質(zhì)交換)能更好地執行氣體交換功能。第三章1舉例說(shuō)明電子顯微鏡技術(shù)與細胞分子生物學(xué)技術(shù)的結合在現代細胞生物學(xué)研究中的應用。超薄切片技術(shù)(固定包埋切片染色)一般用于細胞超微結構觀(guān)察負染色技術(shù)觀(guān)察亞細胞結構,甚至病毒,具有一定的背景清除效果冷凍蝕刻技術(shù)形成斷面,便于觀(guān)察胞質(zhì)中的細胞骨架纖維及其結合蛋白電鏡三維重構技術(shù)前提是能形成蛋白質(zhì)衍射晶體易構建三維結構掃描電鏡技術(shù)通常在觀(guān)察前鍍一層金膜,立體感強但局限于觀(guān)察物體表面應用舉例見(jiàn)基因的分子生物學(xué)2光學(xué)顯微鏡技術(shù)有哪些新發(fā)展它們各有哪些突出優(yōu)點(diǎn)為什么電子顯微鏡不能完全代替光學(xué)顯微鏡相差微分干涉顯微鏡技術(shù)觀(guān)察活細胞成為可能,增加的光程差使圖像立體感更強熒光顯微技術(shù)其特異性檢測所需的觀(guān)察物質(zhì),能排除其他環(huán)境干擾,精確定位激光掃描共焦顯微鏡技術(shù)改變縱向分辨率,不同切面構成的圖像,經(jīng)疊加形成三維結構熒光共振能量轉移技術(shù)主要用于觀(guān)測兩種蛋白是否直接作用及作用的強弱不可取代的原因觀(guān)察非超微結構的需要,觀(guān)察活細胞及其正常生理反應的需要,對一般
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    • 簡(jiǎn)介:目錄索引目錄索引第一章第一章細胞生物學(xué)概述細胞生物學(xué)概述第二章第二章細胞概述細胞概述第三章第三章細胞的分子基礎細胞的分子基礎第四章第四章細胞膜細胞膜第五章第五章細胞連接與細胞外基質(zhì)細胞連接與細胞外基質(zhì)第六章第六章內膜系統內膜系統第七章第七章線(xiàn)粒體線(xiàn)粒體第八章第八章核糖體核糖體第九章第九章細胞骨架細胞骨架第十章第十章細胞核細胞核第十一章第十一章細胞的分裂細胞的分裂第十二章第十二章細胞周期細胞周期第十三章第十三章細胞分化細胞分化第十四章第十四章細胞的衰老和死亡細胞的衰老和死亡第十五章第十五章個(gè)體發(fā)育中的細胞個(gè)體發(fā)育中的細胞附錄附錄名詞解釋名詞解釋第二節第二節原核細胞和真核細胞原核細胞和真核細胞原核細胞與真核細胞的比較特征原核細胞真核細胞細胞大小較小,1ΜM~10ΜM較大,10ΜM~100ΜM細胞核根本區別)無(wú)核膜、核仁(擬核)有核膜、核仁(真核)DNA環(huán)狀雙鏈,不與組蛋白結合線(xiàn)狀雙鏈,與組蛋白結合成染色質(zhì)細胞壁不含纖維素、主要由肽聚糖組成不含肽聚糖,主要由纖維素組成細胞器無(wú)(除核糖體外)有核糖體70S80S內膜系統無(wú)復雜細胞骨架無(wú)有轉錄與翻譯轉錄與翻譯同時(shí)進(jìn)行轉錄在核內,翻譯在胞質(zhì)中進(jìn)行細胞分裂無(wú)絲分裂有絲分裂,減數分裂第三章第三章細胞的分子基礎細胞的分子基礎概述1.原生質(zhì)細胞中的生命物質(zhì),由細胞質(zhì)(包括質(zhì)膜)和細胞核組成。2.元素組成主要元素CHON4種少量元素SPNAKCACLMGFE8種微量元素CUZNMNCOIBRFSISRBA10種3.分子組成無(wú)機化合物水、無(wú)機鹽有機化合物糖、脂、維生素、蛋白質(zhì)(酶)、核酸。細胞的小分子物質(zhì)細胞的小分子物質(zhì)一、水水是細胞內最重要的無(wú)機小分子,占細胞總重量的70。大多數代謝過(guò)程都需要水參與。二、無(wú)機鹽占細胞總重量的19左右,以離子形式存在。維持細胞內的滲透壓和酸堿平衡。作為酶的輔助因子。三、有機小分子是細胞代謝過(guò)程中的中間產(chǎn)物,也是構成生物大分子的基本單位。主要包括單糖、脂肪酸、氨基酸、核苷酸。單糖脂肪酸功能1、構成細胞膜的主要成分。2、能量
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    • 簡(jiǎn)介:智慧樹(shù)知到醫學(xué)細胞生物學(xué)章節測試答案第一章1、構成生物體的基本結構和功能單位是。A細胞膜B細胞器C細胞核D細胞E細胞質(zhì)正確答案細胞2、醫學(xué)細胞生物學(xué)的研究對象是()。A生物體細胞B人體細胞C人體組織D人體器官E人體系統正確答案人體細胞3、()為細胞超微結構的認識奠定了良好的基礎。A組織培養技術(shù)B高速離心裝置C光學(xué)顯微鏡的應用D電子顯微鏡的應用E免疫標記技術(shù)正確答案氨基酸2、DNA分子是由()組成的。A磷酸B核糖C脫氧核糖D堿基E己糖正確答案磷酸,脫氧核糖,堿基3、關(guān)于細胞中無(wú)機鹽的功能,描述有誤的是()。A是細胞含量最多的物質(zhì)B維持細胞內外滲透壓C維持細胞酸堿平衡D是細胞的主要能量來(lái)源E不能與蛋白質(zhì)結合正確答案是細胞含量最多的物質(zhì),是細胞的主要能量來(lái)源,不能與蛋白質(zhì)結合4、關(guān)于細胞大小和形態(tài),描述正確的是()。A人體最大的細胞是卵細胞B人卵細胞是已知最大的細胞C不同種類(lèi)的細胞,其大小有差異D細胞的大小形態(tài)與細胞的功能有關(guān)E真核細胞一般比原核細胞大正確答案人體最大的細胞是卵細胞,不同種類(lèi)的細胞,其大小有差異,細胞的大小形態(tài)與細胞的功能有關(guān),真核細胞一般比原核細胞大
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    • 簡(jiǎn)介:21春學(xué)期(1709、1803、1809、1903、1909、2003、2009、2103)細胞生物學(xué)在線(xiàn)作業(yè)試卷總分100得分100一、單選題共25道試題,共50分1下列()不屬于真核生物基因表達調控的范疇。A復制水平的調控B轉錄水平的調控CRNA加工水平的調控D翻譯水平的調控答案A2在下列細胞結構中不存在CA2ATPASE的是()。A線(xiàn)粒體膜B內質(zhì)網(wǎng)膜C細胞膜D核膜答案D3動(dòng)物細胞中CAMP的主要生物學(xué)功能是活化()。A蛋白激酶CB蛋白激酶AC蛋白激酶KDCA2激酶答案A4正常細胞培養的培養基中常需加入血清,主要是因為血清中含有()。A氨基酸B核酸C生長(cháng)因子D維生素答案C5下面有關(guān)核仁的描述錯誤的是()。A核仁的主要功能之一是參與核糖體的生物合成BRDNA定位于核仁區內C細胞在M期末和S期重新組織核仁D細胞在G2期,核仁消失答案D6下列沒(méi)有細胞壁的細胞是()A支原體B細菌C藍藻D植物細胞13細胞學(xué)的經(jīng)典時(shí)期是指()。A1665年以后的25年B18381858細胞學(xué)說(shuō)的建立C19世紀的最后25年D20世紀50年代電子顯微鏡的發(fā)明答案C14在下列激酶中,除()外,都能使靶蛋白的絲氨酸或蘇氨酸磷酸化。A酪氨酸蛋白激酶B蛋白激酶KC蛋白激酶CD都不對答案A15在第一次減數分裂中()。A同源染色體不分離B著(zhù)絲粒不分離C染色單體分離D不出現交叉答案B16在英國引起瘋牛病的病原體是()。A朊病毒(PRION)B病毒(VIRUS)C立克次體D支原體答案A17關(guān)于細胞周期限制點(diǎn)的表述,錯誤的是()。A限制點(diǎn)對正常細胞周期運轉并不是必需的B它的作用是細胞遇到環(huán)境壓力或DNA受到損傷時(shí)使細胞周期停止的“剎車(chē)“作用,對細胞進(jìn)入下一期之前進(jìn)行“檢查”。C細胞周期有四個(gè)限制點(diǎn)G1/S、S/G2、G2/M和M/G1限制點(diǎn)D最重要的是G1/S限制點(diǎn)答案A18下列由奢侈基因編碼的蛋白是()。A肌動(dòng)蛋白B膜蛋白C組蛋白D血紅蛋白答案D19目前認為支原體是最小的細胞,其直徑約為()
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    • 簡(jiǎn)介:細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)以細胞為研究對象,應用近代物理學(xué)、化學(xué)、實(shí)驗生物學(xué)及分子生物學(xué)的技術(shù)和方法,從細胞整體水平、亞顯微水平和分子水平三個(gè)層面來(lái)研究細胞的結構及其生命活動(dòng)規律的科學(xué)。醫學(xué)細胞生物學(xué)醫學(xué)細胞生物學(xué)以細胞生物學(xué)和分子生物學(xué)為基礎,研究和探討人體細胞的結構、功能、發(fā)生、發(fā)展、成長(cháng)、衰老、死亡的生命活動(dòng)規律及其發(fā)病機理和防治的科學(xué)。膜內在蛋白膜內在蛋白又稱(chēng)膜整合蛋白質(zhì)或鑲嵌蛋白。占膜蛋白總量的7080,其部分鑲嵌于膜中,以非極性氨基酸與脂雙層膜脂疏水區共價(jià)緊密結合,不易從膜上分離下來(lái),跨膜蛋白也屬此列。膜外在蛋白膜外在蛋白他們不直接與脂雙層疏水部分直接相連,而通過(guò)靜電作用、離子鍵、氫鍵與脂分子極性頭部或膜整合蛋白質(zhì)分子親水部分相互作用間接結合。主要分布在膜的內在表面,為水溶性蛋白質(zhì)。細胞外被細胞外被存在于細胞表面的覆蓋物,富含糖類(lèi),也稱(chēng)糖萼。一般指與質(zhì)膜相連的糖類(lèi)物質(zhì),是質(zhì)膜中糖蛋白和糖脂向外延伸的寡糖部分。脂筏模型脂筏模型脂筏是指質(zhì)膜外層富含膽固醇和鞘磷脂,富集而形成有序脂相的微結構域,是一種動(dòng)態(tài)結構。脂筏像一個(gè)蛋白質(zhì)停泊的平臺,其上載有蛋白質(zhì),與膜信號轉到有密切關(guān)系。①許多蛋白質(zhì)聚集于脂筏,便于相互作用②脂筏提供蛋白質(zhì)一個(gè)有利于構象變化的環(huán)境,形成有效構象。通道蛋白通道蛋白由A螺旋構成的介導被動(dòng)運輸的跨膜蛋白,其形成親水G蛋白蛋白一種鳥(niǎo)嘌呤核苷酸結合蛋白,是由Α、Β、Γ三個(gè)亞基組成的異三聚體的可溶性的膜蛋白。是一種具有GTP酶活性,在細胞信號通路中起信號轉換器或分子開(kāi)關(guān)作用的蛋白質(zhì)NONO信號信號NO合成酶NOS催化精氨酸生成NO和瓜氨酸的信號。NOS活性受CA2/鈣調蛋白調控。NO是脂溶性的,血管內皮細胞和神經(jīng)細胞是NO主要生成細胞。NO功能,激活可溶性GC,刺激CGMP合成,引發(fā)多種生物學(xué)效應。受體酪氨酸蛋白激酶受體酪氨酸蛋白激酶本身具有激酶活性,是單次跨膜蛋白,配體與受體結合導致受體二聚化,二聚體內彼此相互磷酸化胞內斷落氨酸殘基。內膜系統內膜系統指位于細胞質(zhì)內在結構、功能、乃至發(fā)生上相聯(lián)系的膜性細胞結構的總稱(chēng)。包括內質(zhì)網(wǎng),高爾基復合體,溶酶體等細胞器和胞質(zhì)內膜性轉運小泡。信號肽信號肽指新合成的蛋白質(zhì)端帶有的由1530個(gè)疏水氨基酸組成的肽段,能被SRP識別并引導蛋白質(zhì)在合成過(guò)程中轉移至內質(zhì)網(wǎng)膜上,最后被信號肽酶水解。蛋白質(zhì)糖基化蛋白質(zhì)糖基化指單糖或寡糖與蛋白質(zhì)共價(jià)結合成糖蛋白的過(guò)程。包括N連接的糖基化和O連接的糖基化。起始轉移序列起始轉移序列位于多肽鏈內的一段疏水區段,具有與N端信號肽同樣的功能,只是不能被信號肽酶切除,從而成為膜蛋白的Α螺旋跨膜結構。終止轉移序列終止轉移序列肽鏈上的一段特殊序列,與內質(zhì)網(wǎng)膜的親和力很
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    • 簡(jiǎn)介:國外醫學(xué)輸血及血液學(xué)分冊2004年第27卷第5期NK細胞的免疫生物學(xué)特性王荷花綜述韓明哲審?!菊咳祟?lèi)NK細胞是機體抗腫瘤和抗病毒感染的天然免疫細胞,有自發(fā)的細胞毒功能,近1O年來(lái)人們發(fā)現NK細胞的識別也具有特異性。NK細胞表達多種受體,按受體識別的分子可分為HLAI類(lèi)分子特異性受體、非HLAI類(lèi)分子特異性受體和共受體三大類(lèi),功能上劃分為活化性受體和抑制性受體兩類(lèi),這些受體對NK細胞的功能有重要的調節作用。本文就NK細胞受體的特點(diǎn)和功能作一綜述,并探討開(kāi)發(fā)NK細胞新型潛在細胞免疫治療的價(jià)值?!娟P(guān)鍵詞】自然殺傷細胞;受體;細胞免疫治療人類(lèi)NK細胞由骨髓造血干細胞發(fā)育而來(lái),約占外周血淋巴細胞的10~15,免疫表型特點(diǎn)為CD3一CD56,因細胞胞體大、胞漿量多、電鏡下觀(guān)察胞內含有致密顆粒,故又稱(chēng)為大顆粒淋巴細胞。NK細胞的發(fā)育成熟非胸腺依賴(lài)性,也無(wú)抗原特異性受體的表達,因此最初被認為是一種天然免疫細胞,具有天然的和淋巴細胞因子活化的細胞毒活性、分泌有免疫調節功能的細胞因子以及抗體依賴(lài)性細胞介導的細胞毒活性。早期人們發(fā)現NK細胞殺傷的靶細胞常有HLAI類(lèi)分子表達水平的下調I1,另外NK細胞也能介導排斥同種異體的正常骨髓細胞_2。近來(lái)隨著(zhù)NK細胞受作者單位300020天津,中國醫學(xué)科學(xué)院中國協(xié)和醫科大學(xué)血液學(xué)研究所血液病醫院433綜述體的不斷發(fā)現及其對NK細胞功能調節的研究,使人們認識到NK細胞識別功能的特異性,有利于開(kāi)發(fā)新的細胞免疫治療。1NK細胞受體NK細胞表達多種不同的受體,按其識別的配體可分為三大類(lèi)3HLAI類(lèi)分子特異性受體、非HLAI類(lèi)分子特異性受體和其他受體,根據受體的結構特點(diǎn)又可劃分為免疫球蛋白樣超家族受體和C型凝集素超家族受體兩大家族I4。1.1HLAI類(lèi)分子特異性受體這一大類(lèi)受體識別的配體是HLAI類(lèi)分子,它包括免疫球蛋白樣超家族受體殺傷細胞免疫球蛋白樣受體KILLERCELLIMMUNOGLOBULINLIKERECEPTORS,KIR23DRUKERBJ。SAWYERSCL,KANTARJIANH,ETA1.ACTIVITYOFASPECI.CINHIBITOROFTHEBETABLTYROSINEKINASEINTHEBLASTCRISISOFCHRONICMYELOIDLEUKEMIAANDACUTELYMPHOBLASTICLEUKEMIAWITHTHEPHILADELPHIACHROMOSOME.NENGLJMED,2001,34410381042.24KANTARJIANH,SAWYERSC,HOCHHAUSA,ETA1.HEMATOLOGICANDCYTOGENETICRESPONSESTOIMATINIBMESYLATEINCHRONICMYELOGENOUSLEUKEMIA.NENGLJMED,2002,346645652.25TALPAZM,SILVERRT,DRUKERBJ,ETA1.IMATINIBINDUCESDURABLEHEMATOLOGICANDCYTOGENETICRESPONSESINPATIENTSWITHACCELERATEDPHASECHRONICMYELOIDLEUKEMIA;RESULTSOFAPHASE2STUDY.BLOOD,2002,9919281937.26SAWYERSCL。HOCHHAUSA,FELDMANE。ETA1.IMATINIBINDUCESHEMATOLOGICANDCYTOGENETICRESPONSESINPATIENTSWITHCHRONICMYELOIDLEUKEMIAINMYELOIDBLASTCRISISRESULTSOFAPHASE1STUDY.BLOOD,2002,9935303539.27KANTARJIANHJORGEC,O’BRIENS,ETA1.HIGHRATESOFEARLYMAJORANDCOMPLETECYTOGENETICRESPONSESWITHIMATINIBMESYLATETHERAPYGIVENAT400MGOR800MGORALLYDAILYINPATIENTSWITHNEWLYDIAGNOSEDPHILADELPHIACHROMOSOMEPOSITIVECHRONICMYELOIDLEUKEMIAINCHRONICPHASE.PROCAMSOCCLINONCO1.2002。21261AABSTR.28DRUKERBJ,FORTHEIRISINTERNATIONALRANDOMIZEDIFNVS.STI571STUDYGROUPSTI571GLEEVEC/GLIVECIMATINIBVERSUSINTERFERONIFN一CYTARABINEASINITIALTHERAPYFORPATIENTSWITHCMLRESULTSOFARANDOMIZEDSTUDY.PROCAMSOCCLIN0NC。2002,21LAABSTR.29DRUKERBJ。SAWYERSCL,CAPDEVILLER,ETA1.CHRONICMYELOGENOUSLEUKEMIA.HEMATOLOGY,AMSOCHEMATOLEDUCPROGRAM2001,87112.3O0’BRIENSG,VALLANCESE,CRADDOCKC.ETA1.PEGINTRONANDST1571COMBINATIONEVALUATIONSTUDYPISCESINCHRONICPHASECHRONICMYELOIDLEUKAEMIA.BLOOD,2001。98846ASUPPL1,ABSTR.31DRUKERB,KANTARJIANH,TALPAZM,ETA1.APHASEISTUDYOFTHECOMBINATIONOFGLEEVECIMATINIBMESYLATEWITHLOWDOSEARAC.BLOOD,2001,98845ASUPPL1,ABSTR.32BRIANJ.DRUKER.IMATINIBALONEANDINCOMBINATIONFORCHRONIEMYELOIDLEUKEMIA.SEMINARSINHEMATOLOGY,2003,4015058.收稿日期2004一O4一O1本文編輯羅幼平IL£}}維普資訊HTTP//WWWCQVIPCOM國外醫學(xué)輸血及血液學(xué)分冊2004年第27卷第5期HLAI類(lèi)分子特異性活化性受體KIR和CD94/NKG2C、E、H的結構共同點(diǎn)是受體胞質(zhì)尾短,無(wú)ITIM基序,受體活化信號的轉導需DAP12_1。DAP12胞質(zhì)尾含有由YXXL/I氨基酸序列組成的2個(gè)ITAMIMMUNORECEPTORTYROSINEACTINGMOTIF基序。NK細胞活化性受體的集結導致YXXL序列中酪氨酸快速而短暫的磷酸化,隨后募集并活化蛋白酪氨酸激酶SYK或ZAP70轉導活化信號,使NK細胞活化。雖然NCR目前尚未明確配體,但與單克隆抗作用的研究發(fā)現其信號轉導類(lèi)似于上述途徑,其中NKP46和NKP30的信號轉導通過(guò)含經(jīng)典ITAM的信號轉導肽CD3鏈,NKP44則與DAP12結合。NKG2D活化信號的轉導由DAP10介導,與DAP12不同,DAP10分子胞質(zhì)尾無(wú)ITAM結構,但含有一個(gè)YXXM氨基酸序列,其酪氨酸磷酸化后與PI一3亞單位P85結合,啟動(dòng)活化信號的轉導口。因此,NKG2D活化信號的轉導途徑完全不同于NK細胞HLAI類(lèi)分子特異性活化性受體。3NK細胞功能的調節很顯然,NK細胞的功能受其表達的抑制性受體和活化性受體轉導的負性信號和活化信號之間平衡機制調節。NK細胞表達的受體中,HLAI類(lèi)分子特異的抑制性受體轉導抑制NK細胞活化的負性信號,NCR、NKG2D和HLAI類(lèi)分子特異的活化性受體轉導活化信號,共受體則協(xié)同NK細胞功能的活化。對同一NK細胞表達的HIAI類(lèi)分子特異性受體而言,雖然識別相同或相似HIAI類(lèi)分子的KIR和CD94/NKG2抑制性受體和活化性受體都能與相應的配體結合,但通常抑制性受體與HLAI類(lèi)分子結合的親和力顯著(zhù)高于活化性受體N。另外,僅少數NK細胞克隆同時(shí)表達識別相同HLAI類(lèi)分子同種型的活化性受體和抑制性受體,通常大多數NK細胞克隆表達的是不同HLA1分子同種型的抑制性受體。所以,在正常情況下,NK細胞的抑制性受體與自身正常細胞表達的HLAI類(lèi)分子結合后,轉導抑制該NK細胞活化的負性信號,導致啟動(dòng)NK細胞活化的早期階段分子失活,從而阻止NK細胞的活化,即NK細胞以轉導負性信號占優(yōu)勢。這也就阻止了NK細胞對宿主自身正常細胞的殺傷作用,避免自身免疫反應的發(fā)生。病理情況下,當NK細胞識別自身HIAI類(lèi)分子水平下調或丟失的腫瘤細胞、病原體感染的細胞時(shí),抑制性受體與HIAI類(lèi)分子作用水平減低或不能與之結合,導致抑制NK細胞活化的信號減弱或缺乏,則啟動(dòng)活化性受體轉導的活化信號,使該NK細胞活化,發(fā)揮細胞毒功能,裂解靶細胞。若該靶細胞同時(shí)表達MLCA/MLCB分子,可激活不同信號轉導途徑的活化性受體NKG2D,進(jìn)一步增強NK細胞的活化信號,提高宿主的疾病防御能力。綜上所述,NK細胞通過(guò)表達多種受體的調節方式,整合抑制性受體和活化性受體轉導的負性信號和活化信號,使機體能夠區分自身正常細胞和HLA1分子水平下調或丟失的異常細胞,從而闡明了NK細胞免疫監視“丟失自我”MISSINGSELF假說(shuō)的機制。4NK細胞的免疫治療應用NK細胞識別“自己”和“非己”的特性,調節NK細胞的活性,可能為免疫治療提供新的途徑。理論上阻斷抑制性受體與MHCI類(lèi)分子的相互作用,解除對NK細胞活化的抑制,能夠有效增強NK細胞的抗腫瘤效應。KOH等N實(shí)驗研究證明,采用單克隆抗體封閉同基因小鼠NK細胞抑制性受體或者過(guò)繼性MHCI不相合異基因NK細胞凈化骨髓和自體骨髓移植后的維持治療,有效提高了白血病小鼠長(cháng)期無(wú)白血病復發(fā)存活率,同時(shí)對造血重建無(wú)明顯影響。這一效應同樣能在病毒感染如巨細胞病毒感染時(shí)巨細胞病毒能夠編碼MHCI類(lèi)分子樣類(lèi)似物以逃逸免疫系統的殺傷發(fā)揮作用。在異基因造血干細胞移植中ALLOSCT,供一受者問(wèn)NK細胞識別的特異性主要指抑制性受體識別的特異性,即兩者抑制性受體識別的配體是否相合,另外由于移植預處理的作用使受者NK細胞基本被清除,所以移植后主要存在的是供者NK細胞的同種反應性,即指受者M(jìn)HCI類(lèi)基因不編碼供者所有NK細胞抑制性受體識別的MHCI類(lèi)分子。因此,此NK細胞亞群KIR抑制性受體不能與受者M(jìn)HCI類(lèi)分子結合,從而阻斷抑制信號的轉導,有利于供者NK細胞的活化,增強移植后抗殘留腫瘤細胞的功能。RUGGERI等發(fā)現在白血病患者HLA半相合干細胞移植后,供一受者方向KIR一配體不相合的受者體內可檢測到供者同種反應性NK細胞克隆,并證明供一受者方向KIR一配體不相合有利于患者的長(cháng)期無(wú)病生存,同時(shí)防止急性移植物抗宿主病GVHD的發(fā)生。小鼠移植模型證明供者同種反應性NK細胞不僅能夠有效清除殘留白血病細胞,而且分別通過(guò)進(jìn)一步清除受者預處理殘留的T細胞和抗原遞呈細胞,促進(jìn)植入以及阻止AGVHD。后來(lái)GIEBEL等223在白血病患者無(wú)關(guān)供者造血干細胞移植中也證明供一受者方向KIR表位不相合有助于患者的無(wú)病生存,減少Ⅲ~Ⅳ度AGVHD的發(fā)生。實(shí)際上,同種反應性NK細胞主要攻擊受者造血細維普資訊HTTP//WWWCQVIPCOM
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    • 簡(jiǎn)介:午曉群等NKG2D真核表達載體的構建及其對YT細胞生物學(xué)功能的影響第L2期分子與細胞免疫學(xué)NKG2D真核表達載體的構建及其對YT細胞生物學(xué)功能的影響①許曉群張建⑦④張彩游力張建華劉金生王郡甫高春義田志剛⑦山東省醫學(xué)科學(xué)院基礎醫學(xué)研究所,濟南250062885中國圖書(shū)分類(lèi)號92.12文獻標識碼A文章編號100X20O5120885.04摘要目的建立NK細胞受體NKG2D真核表達載體,通過(guò)轉染NK細胞系YT,初步探討NKG2D分子對YT細胞系殺傷功能的增強作用。方法用RTPCR方法從NK92細胞中調取NKG2D基因片段,克隆到PGEM.TEASY載體并對克隆的DNA片段進(jìn)行序列分析。用限制內切酶EEORI和BAMHI消化PCEM.TEASY/NKG2D重組質(zhì)粒,分離NKG2D片段,并插入真核表達質(zhì)粒PEGFPN1的相應限制酶位點(diǎn),酶譜分析鑒定重組表達載體PEGFPN1/NKG2D。然后經(jīng)脂質(zhì)體介導轉染CHO細胞和YT細胞。應用熒光顯微鏡觀(guān)測、WESTERNBLOT方法和免疫組化染色對轉染細胞內PEGFPNI/NKG2D的表達進(jìn)行鑒定,MTR方法觀(guān)察YT細胞對腫瘤細胞的殺傷功能。結果RTPCR擴增獲得650BP基因片段,經(jīng)DNA序列分析證明所獲得的DNA序列與文獻報道的NKG2D序列一致。轉染的CHO細胞在熒光顯微鏡下發(fā)出強綠色熒光,WESTERNBLOT分析顯示重組蛋白能特異地與抗人NKG2D單克隆抗體結合;免疫組化檢測顯示,轉染的CHO中有棕色顆粒,證明所構建的NKG2D真核表達載體可以在細胞中表達;轉染NKG2D真核表達載體的YT細胞對乳腺癌細胞具有更強的殺傷效果。結論所獲得的表達NKG2D分子的真核表達載體,通過(guò)轉染YT細胞,初步鑒定所表達NKG2D分子具有生物學(xué)功能,可以提高NK細胞對腫瘤細胞的殺傷活性。關(guān)鍵詞NKG2D受體;NK細胞;基因轉染;真核表達CONSTRUCTIONOFNKG2DEUKARYOTICEXPRESSIONVECTORANDEFECTONYTCELLBIOLOGICALFUNCTIONXU‰,ZHANGJ/AN,ZHANGCAI,YOU12,ZHANGANHNA,刪J/NSHENG,WANGJUNFU,GAOCHUNYI,TIANZHIGANG.INSTITUEOFBASICMEDICINE,SHANDONGACADEMYOFMEDICALSCIENCE,J/NAN250062,CHINAABSTRACTOBJECTIVETOESTABLISHNKCELLRECEPTORNKG2DEUKARYOTICEXPRESSIONVECTORANDINVESTIGATEONTHECYT0CITYOFNKCELLFINYTTRAECTEDWITHNKG2D.METHODSANKG2DGENEFRAGMENT,WITHALENGTH0FABOUT650BP,WASAMPLIFIEDFROMTHENK一92CEILLINEBYRTPCRANDWASSEQUENCEDBYCLONEDTOPNIDPGEMTEASY.THERECOMBINANTPLMIDPCTEASY/NKG2DWASDIGESTEDWITHECOR工ANDBAMH工,THENNKG2DFRAGMENTWASISOLATEDANDINSERTEDINTOTHECORRESPONDINGRESTRICTIONSITEONEUKARYOFIEEXPRESSIONVECTORPEGFPN1.THELIPOFECTINWASUSEDTOTRANSECTMCOMBIMNTEUKARYO6EEXPRESSIONPLASMIDINTOTHECHOANDYRCELLS.THEEXPRESSIONLEVELOFNKG2DGENEINTMECTEDCHOCEILSWASDETECTEDBYFLUORESCENCEMICROSCOPY,WESTERNBLOTANDIMMUNOHISTOEHOMICALSTAINING.RESULTSTHENGTHOFEDNAFRAGMENTAMPLIFIEDBYRTPCRWASCONSISTENTWITHTHAT0FNKG2D.DNASEQUENCING0FPGEMTEASY/NKG2DREVEALEDTHATTHECLONEDDNASQUENCEWASIDENTICALTOTHAT0FREPORTEDNKG2D.THEEENFLUORESCENCECOULDBESEENINTRANSFECTEDCHOCELLSUNDERFLUORESCCNEEMICROSCOPE.WESTERNBLOTANDIMMUNOHISTOCHEMICALSTAI,DETECTIONSHOWEDTHATNKG2DEXPRESSEDINTRANSFECTEDCELLS.TRANSFECTEDYTCELLSHAVESTRONGEREYTOTOXICITYAGAINSTTUMORCEIL.CONDUSIONNKG2DEUKARYOAEEXPRESSIONVECTORSHOWEDBIOLOGICALFUNCTIONBYTRANSFEETEDINTONKCEILLINEYTANDCOULDINCREASEYTCYTOLYFIEACTIVITY.KEYWORDSNKG2DRECEPTOR;NKCEIL;GENETRANSFECFION;EUKARYOFICEXPRESSIONNKG2D是近年來(lái)發(fā)現的表達于NK細胞、NKT細胞、7KI細胞及CD8細胞等效應細胞表面的NK細胞受體,是NK細胞識別靶細胞的一種主要結構“。由于腫瘤細胞不表達或低表達MHC.I①本文受?chē)易匀豢茖W(xué)基金項目30371302、3047152和山東省自然科學(xué)基金資助項目YMCZ4資助②山東大學(xué)藥學(xué)院,濟南250012③通訊作者作者簡(jiǎn)介許曉群1975年一,男,碩士,助理研究員,主要從事基因工程和分子免疫學(xué)研究。類(lèi)分子,使得腫瘤特異性MHC限制性細胞毒性T細胞CTL不能發(fā)揮作用。在這種情況下,識別非MHC.I類(lèi)分子的NKG2D在介導NK細胞識別并溶解腫瘤細胞及感染細胞的免疫應答中可能發(fā)揮關(guān)鍵作用L2】。近年來(lái),對于NK細胞的分化發(fā)育、識別殺傷和功能調節的分子機制的研究日益引起重視。我們旨在構建NKG2D基因的真核表達載體并轉染NK細胞系,為進(jìn)一步研究NKG2D如何在NK細胞中發(fā)揮效應功能及其腫瘤生物治療的應用提供一種研究工具。維普資訊HTTP//WWWCQVIPCOM午曉群等NKG2D真核表達載體的構建及其對YR細胞生物學(xué)功能的影響第12期ECORLBAMHLIECORLIBAMHLECORI_PG.FPNN/NKG2D535BPIFEGFP/KANNEOR//HIE.1?1D川R圖1重組質(zhì)粒PEGFP.N1/NKG2D構建示意圖№.1SCHEMATICCONSTRUCTIONOFPLASMIDPEGFPN1/NKG2D圖2重組質(zhì)粒PEGFPN1/NKG2D的酶切鑒定№.2RESTRICTIVEENZYMEDIGESTIONANALYSISOFRECOMBINANTPLASMIDPEGFP.N1/NKG2DNOTE1.NKG2DGENEFR,TNONT;2.PEGFPNI/NKG2DDIGESTEDWITHECORIANDBANLHI3.PCEM.TEASY/NKG2DDIGESTEDTHECORIANDBAMHI;4.1KBDNAMARKER.圖3GFP在CHO中的表達200№.3EXPRESSIONOFGFPINCHOS200NOTECHOSTRANSFECTEDBYPEGFPNI/NKG2DAFTER24HOURS.KDA6050402520一L5一88728圖4WESTERNBLOT鑒定NKG2D重組蛋白№.4ANALYSISOFRECOMBINANTPROTEINNKG2DBYWESTERNBLOTNOTE1.PRESTAINEDPROTEINLADDER;2.NONTRANDECTEDCHOS;3.CHOSTLDBFTEDBYPEGFPNI/NKG2D.AB圖5免疫組化染色檢測NKG2D在CHO中表達200№.5DETECTIONOFNKG2DEXPRESSIONINCHOSBYILI,DNUNOHISTOCHEMICALSTALG200NOTEA.CHOTRANSFECTEDBYEMPTYPLASMID;B.CHOTRANDECTEDBYPEG}3NI/NKG2D.圖6NKG2D對YT細胞殺傷OMDA231乳腺癌細胞的影響№.6INFLUENCEOFNKG2DONYT曲AGAINSTOMDA231CELLS2.3NKG2D真核表達載體轉染的CHO細胞中NKG2D表達水平的鑒定①綠色熒光鑒定將重組質(zhì)粒PEGFPN1/NKG2D轉染CHO細胞繼續培養24、.旌一譬鬻辨。踟∞鯽加加一O/0一魯I3L蓉;U維普資訊HTTP//WWWCQVIPCOM
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