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      • 簡介:1分子生物學檢測技術分子生物學檢測技術分子生物學診斷技術是現代分子生物學與分子遺傳學取得巨大進步的結晶,是在人們對基因的結構以及基因的表達和調控等生命本質問題的認識日益加深的基礎上產生的。近年來,分子生物學診斷技術的方法學研究取得了很大進展,先后建立了限制性內切酶酶譜分析、核酸分子雜交、限制性片段長度多態性連鎖分析等方法。1985年由美國CETUS公司人類遺傳學研究室MULLIS等創立并隨后迅速發展起來的DNA體外擴增技術(POLYMERASECHAINREACTION,PCR),以及90年代發展起來的DNA芯片技術(DNACHIP),又將分子生物學診斷技術提高到一個嶄新的階段。一、一、核酸分子雜交核酸分子雜交(一)概述具有一定互補序列的核苷酸單鏈在液相或固相中按堿基互補配對原則締合成異質雙鏈的過程叫核酸分子雜交。應用該技術可對特定DNA或RNA序列進行定性或定量檢測。到目前為止,分子雜交技術在基因診斷中仍占重要地位,它按反應支持物可分為固相雜交和液相雜交兩種,前者應用較廣,有SOUTHERN印跡雜交、點雜交、夾心雜交(三明治雜交)、原位雜交和寡核苷酸探針技術等。核酸分子雜交主要涉及兩個方面待測的DNA或RNA,以及用于檢測的DNA或RNA探針。探針標記的好壞決定檢測的敏感性。1、SOUTHERN印跡雜交是最經典和應用最廣泛的雜交方法。根據基因探針與待測DNA限制酶酶解片段雜交的帶譜,可以直接確定宿主基因的缺陷所在或病原體的存在狀態。3光檢測核酸的含量。BDNA技術是目前核酸直接量化檢測技術中靈敏度最高的方法之一。但該方法成本較高,不利于其普及應用。5、原位雜交直接在組織切片或細胞涂片上進行雜交反應。該技術可檢出細胞中單拷貝MRNA,估算病毒在宿主細胞中復制和轉錄的程度,對于病毒感染(特別是具有長潛伏期的病毒感染)和其它退行性疾病的診斷很有用。6、液相雜交液相雜交酶免疫法量化檢測核酸擴增產物這種方法同固相雜交量化檢測核酸擴增產物原理大致相同,只是將反應體系換為液相環境。應用液相雜交量化檢測維生素D結合蛋白基因,在PCR擴增時通過摻入法使產物上掛有地高辛分子,再通過液相雜交與標記有生物素的探針結合后,被包被有鏈親和素的酶標微孔板捕獲,利用辣根酶標記的地高辛抗體使酶反應底物OPD或TMB顯色。據報道,核酸擴增產物與特異性探針在液相中的雜交效率要高于在酶標微孔板上的結合,液相雜交的靈敏度通常是固相雜交的10~20倍,可以檢測到PG水平。二、二、聚合酶鏈反應(聚合酶鏈反應(PCR)PCR是近年來發展起來的一種快速的DNA片段擴增技術,它通過分別與雙鏈目的DNA序列兩個3’端互補的寡核苷酸引物,由TAQDNA聚合酶從5’到3’進行一系列DNA聚合反應,擴增出所需要的目的DNA。由于每個循環中合成的引物延伸產物可作為下一循環中的模板,因而每次循環中靶DNA的拷貝數幾乎呈幾何級數增長,因此,20次PCR循環將產生約一百萬倍(220)的擴增產物。這種1985年由KARYMULLIS建立的方法最早在美國CETUS公司人類遺傳學
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      • 簡介:第1頁共3頁分子生物學分子生物學B基因組與基因、基因組與基因、DNADNA復制測驗題復制測驗題學號學號專業專業班級班級姓名姓名一、名詞解釋(每小題一、名詞解釋(每小題3分,共分,共30分)分)1、復制子復制子2、單復制子、單復制子3、多復制子、多復制子4、端粒端粒是真核生物染色體的兩個末端序列,與特定的蛋白質形成復合物。、端粒端粒是真核生物染色體的兩個末端序列,與特定的蛋白質形成復合物。5、端粒酶是由、端粒酶是由RNARNA和蛋白體組成的復合體,屬專一的依賴和蛋白體組成的復合體,屬專一的依賴RNARNA的逆轉錄酶,能以自身的逆轉錄酶,能以自身RNARNA為模板反轉錄合成端粒為模板反轉錄合成端粒DNADNA序列,以補償細胞分裂時染色體末端的縮短,保持端粒長度序列,以補償細胞分裂時染色體末端的縮短,保持端粒長度的穩定,恢復端粒的功能。的穩定,恢復端粒的功能。6、滾環式復制、滾環式復制DNA聚合酶III以3OH為引物,以負鏈為模板,從3OH端逐步增添脫氧核苷酸,隨著復制的進行,5‘端長度即不斷增加。這一過程中,單鏈尾巴的延伸伴隨著雙鏈DNA的繞軸滾動,故稱為滾環式復制。7、基因是編碼一條多肽鏈或功能、基因是編碼一條多肽鏈或功能RNARNA所必需的全部核苷酸序列。所必需的全部核苷酸序列。8、基因組是指某一特定生物單倍體染色體的數目及其所攜帶的全部基因。、基因組是指某一特定生物單倍體染色體的數目及其所攜帶的全部基因。9、假基因沒有功能的基因稱為假基因。、假基因沒有功能的基因稱為假基因。第3頁共3頁5、真核生物和原核生物復制起點在數量上有什么不同在復制完成之前,它們復制啟動的、真核生物和原核生物復制起點在數量上有什么不同在復制完成之前,它們復制啟動的次數又有什么差異(次數又有什么差異(5分)分)6、什么叫拓撲異構酶拓撲異構酶、什么叫拓撲異構酶拓撲異構酶Ⅰ和拓撲異構酶和拓撲異構酶Ⅱ各自的特點是什么旋轉酶是屬于哪各自的特點是什么旋轉酶是屬于哪一類(一類(1010分)分)7、多數生物的遺傳物質是、多數生物的遺傳物質是DNADNA,請問,請問DNADNA的復制方式有哪些(的復制方式有哪些(1010分)分)
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      • 簡介:第1頁共3頁2014201520142015學年第一學期學年第一學期分子生物學分子生物學B基因組與基因、基因組與基因、DNADNA復制測驗題復制測驗題學號學號專業專業班級班級姓名姓名一、名詞解釋(每小題一、名詞解釋(每小題3分,共分,共30分)分)1、復制子復制子2、單復制子、單復制子3、多復制子、多復制子4、端粒端粒是真核生物染色體的兩個末端序列,與特定的蛋白質形成復合物。、端粒端粒是真核生物染色體的兩個末端序列,與特定的蛋白質形成復合物。5、端粒酶是由、端粒酶是由RNARNA和蛋白體組成的復合體,屬專一的依賴和蛋白體組成的復合體,屬專一的依賴RNARNA的逆轉錄酶,能以自身的逆轉錄酶,能以自身RNARNA為模板反轉錄合成端粒為模板反轉錄合成端粒DNADNA序列,以補償細胞分裂時染色體末端的縮短,保持端粒長度序列,以補償細胞分裂時染色體末端的縮短,保持端粒長度的穩定,恢復端粒的功能。的穩定,恢復端粒的功能。6、滾環式復制、滾環式復制DNA聚合酶III以3OH為引物,以負鏈為模板,從3OH端逐步增添脫氧核苷酸,隨著復制的進行,5‘端長度即不斷增加。這一過程中,單鏈尾巴的延伸伴隨著雙鏈DNA的繞軸滾動,故稱為滾環式復制。7、基因是編碼一條多肽鏈或功能、基因是編碼一條多肽鏈或功能RNARNA所必需的全部核苷酸序列。所必需的全部核苷酸序列。8、基因組是指某一特定生物單倍體染色體的數目及其所攜帶的全部基因。、基因組是指某一特定生物單倍體染色體的數目及其所攜帶的全部基因。9、假基因沒有功能的基因稱為假基因。、假基因沒有功能的基因稱為假基因。第3頁共3頁5、真核生物和原核生物復制起點在數量上有什么不同在復制完成之前,它們復制啟動的、真核生物和原核生物復制起點在數量上有什么不同在復制完成之前,它們復制啟動的次數又有什么差異(次數又有什么差異(5分)分)6、什么叫拓撲異構酶拓撲異構酶、什么叫拓撲異構酶拓撲異構酶Ⅰ和拓撲異構酶和拓撲異構酶Ⅱ各自的特點是什么旋轉酶是屬于哪各自的特點是什么旋轉酶是屬于哪一類(一類(1010分)分)7、多數生物的遺傳物質是、多數生物的遺傳物質是DNADNA,請問,請問DNADNA的復制方式有哪些(的復制方式有哪些(1010分)分)
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      • 簡介:第1頁共2頁2014201520142015學年第一學期學年第一學期分子生物學分子生物學B轉錄與翻譯測驗題學號專業班級姓名一、名詞解釋(每小題一、名詞解釋(每小題3分,共分,共30分)分)1、轉錄2、啟動子3、密碼子的簡并性4、多核糖體循環5、增強子6、多順反子MRNA7、HNRNA8、SD序列9、分子伴侶10、終止子第2頁共2頁二、問答題(二、問答題(70分)分)1、試列出TRNA分子上與多肽合成有關的位點。(10分)2、試述RNA分類,各類RNA的結構特點及其在蛋白質合成中的作用。(10分)3、真核生物蛋白質合成后的運輸是怎樣進行的(10分)4、原核和真核細胞在蛋白質翻譯過程有哪些不同之處(20分)5、真核生物三種RNA聚合酶的啟動子的結構各有何特點(10分)6、說明原核生物RNA合成的終止機制。(10分)
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      • 簡介:臨床分子生物學檢驗技術試題及答案臨床分子生物學檢驗技術試題及答案1、分子生物學檢驗技術是以核酸或蛋白質為分析材料,通過分析基因的結構、表達的變化和由此而導致的基因功能的改變,為疾病的研究和診斷提供更準確、更科學的信息和依據的一門學科。2、請說明分子生物學檢驗技術在臨床試驗診斷中的應用。(1)感染性微生物的檢測。如用PCR技術進行甲型肝炎病毒的檢測、乙型肝炎病毒的檢測和解脲脲原體的檢測等。(2)基因突變的檢測。如用PCR一限制性片段長度多態性(RFLP技術檢測地中海貧血基因突變。(3)法醫學檢測。如用PCR微衛星檢測技術進行親子關系的鑒定和個體識別。(4)基因異常表達的檢測。如用CDNA表達的芯片技術進行基因異常表達的檢測。(5)基因定位。如用原位雜交技術進行組織與細胞中基因表達的定位。3、基因組是一個細胞或一種生物體的整套遺傳物質。4、基因是基因組中一個功能單位,是貯存有功能的蛋白質多肽鏈信息或RNA序列信息及表達這些信息所必需的全部核苷酸序列。5、原核生物是細菌、支原體、衣原體、立克次體、螺旋雙鏈RNA和單鏈RNA;有環狀分子,也有線性分子。但無論是哪種核酸類型,一種病毒顆粒中核酸成分只能為一種,或DNA,或RNA。(3)基因組中有基因重疊現象,這種結構的意義在于使較小的基因組能攜帶較多的遺傳信息。(4)基因組中具有操縱子結構。(5)病毒基因可連續也可間斷。(6)基因組中重復序列少。(7)基因組中非編碼區少。(8)病毒基因組是單倍體。(9)病毒基因組核酸序列中功能相關的蛋白質基因往往叢集在基因組的一個或幾個特定部位,形成一個功能單位或轉錄單元。(10)病毒基因組含有不規則的結構基因。11、真核生物基因組的結構特點(1真核生物基本上不存在操縱子結構,一個結構基因轉錄生成一條MRNA,即MRNA是單順反子,許多蛋白是由相同或不同的亞基構成,因此涉及多個基因的協調表達。(2)基因組中非編碼的區域多于編碼區域,并且,編碼蛋白質的基因一般是不連續的斷裂基因,即有外顯子和內含子,在轉錄后經剪切成成熟MRNA后,才能翻譯成蛋白質。(3)基因組DNA有重度、中度和低度三種重復序列。(4)
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      • 簡介:分子生物學實驗室安全及常用儀器介紹,授課方旅平聯系方式2186772(O);13950188980,內容介紹,,分子生物學實驗安全常識11分子生物學實驗室的基本要求12實驗室電、氣、水、火13化學試劑的安全使用14微生物的危害及處理15放射性物質的安全使用16紫外線輻射的危害及防護17廢棄物的處理分子生物學功能實驗室使用注意事項,分子生物學實驗安全常識,11分子生物學實驗室的基本要求,遵守公共平臺管理辦法遵守公共平臺通行證管理辦法遵守公共平臺安全管理制度遵守公共平臺有償使用管理辦法遵守公共平臺檢查制度及違規處罰條例,,分子生物學實驗安全常識,12實驗室電、氣、水、火,連線儀器連線必須使用帶有接地的三根線的護套線,不可使用普通的塑料絞線。電話線可用普通的塑料絞線。嚴禁私拉亂扯。接地儀器應有良好的接地,提高儀器的穩定性及安全系數。維修儀器出現故障時,應切斷電源,立即向實驗室負責人報告。維修儀器時必須切斷電源,方可拆機修理。墻電不得私自對墻電進行維修、改造,該工作由實驗室負責人進行計劃,由相關專業人員進行維修、改造。檢查如遇線路老化或損壞應及時地更換。觸電斷電或絕緣脫離?急救電燈進入實驗室,有需要時打開電源開關、排氣扇;離開實驗室時若無人請關閉電燈及排氣扇??照{進入實驗室,有需要時可打開空調,溫度不得低于27℃;每天下班時實驗室負責人將關閉空調。若在非上班時間內打開空調,離開時請關閉,電,,,危險,節約,,分子生物學實驗安全常識,12實驗室電、氣、水、火,氣,搬運搬運或轉動鋼瓶時,不得用手執著開關閥移動。使用按氣瓶的類別選用減壓器,安裝時螺扣應擰緊,并檢漏。開啟鋼瓶逆時針方向為開;先開總閥,后開減壓閥。關閉鋼瓶順時針方向為關;先關總閥,后關減壓閥。氣嘴保護用死扳手夾緊氣嘴后再開總閥。安全氣瓶內的氣體不可用盡。惰性氣體應剩余005MPA以上壓力的氣體??扇細怏w應剩余02MPA以上壓力的氣體。氫氣應剩余20MPA以上壓力的氣體。存放分類分處存放直立放置時要穩妥;氣瓶要遠離熱源;避免曝曬和強烈振動;一般實驗室內存放氣瓶量不得超過兩瓶。氫氣瓶和氧氣瓶不能同存一處。,,分子生物學實驗安全常識,12實驗室電、氣、水、火,水,上水水龍頭或水管漏水時,應及時向實驗室負責人報告,以便及時維修。下水水池內不得倒入培養基、瓊脂糖膠等凝膠物質;清洗廢液缸時請注意將其中的固體物質倒入到垃圾桶后才能沖洗,特別是TIP和EPPENDORF管。下水道排水不暢時,應及時向實驗室負責人報告,以便及時疏通。冷卻水輸水管必須使用橡膠管,不得使用乳膠管;上水管與水龍頭的連接處及上水管、下水管與儀器或冷凝管的連接處必須用管箍夾緊;下水管必須插入水池的下水管中。純凈水應按照“操作規程”進行操作;取水時應注意及時地關閉取水開關,防止溢流。,分子生物學實驗安全常識,12實驗室電、氣、水、火,火,報警119(說明火源、火情、單位名稱、地理位置,或明顯標志)?措施早發現、早處理、早報告?滅火?學會使用滅火器(一拔、二握、三瞄、四掃)?沉著、冷靜?易燃固體、易燃氣體、易燃液體和帶電物體著火時,可用干粉滅火器滅火;?導線或電器著火時,應先斷電,再用干粉滅火器滅火。切不可用泡沫滅火器,此滅火器導電。?衣服著火時,應盡快地脫掉衣服,并用水滅火?;蚓偷貪L動,切忌外跑。防火火災不能預期、不能杜絕、只能預防?消除火災隱患(電、火、氣、試劑)?備逃生四件寶(滅火器、繩、手電筒、防毒面具),分子生物學實驗安全常識,13化學試劑的安全使用,?標識自配試劑應貼標簽,并注明化合物名稱、濃度、配制日期,以及配制人姓名。,總原則藥品狀態定口徑,瓶塞取決酸堿性;受熱見光易分解,存放低溫棕色瓶;特殊試劑特殊放,互不反應要記清。,分子生物學實驗安全常識,13化學試劑的安全使用,易燃易爆化學試劑一般將閃點在25℃以下的化學試劑列入易燃化學試劑,它們多是極易揮發的液體,遇明火即可燃燒。有毒化學試劑以較小劑量進入人體而導致疾病或死亡的才被劃為有毒物質。腐蝕性化學試劑化學試劑碰到皮膚、粘膜、眼、呼吸器官都有及時清洗,如各種酸和堿、溴、苯酚等。強氧化性化學試劑包括過氧化物和含有強氧化能力的含氧酸及其鹽,如硝酸銨、高氯酸及其鹽、重鉻酸及其鹽等。放射性化學試劑同位素示蹤技術的發展,廣泛應用于生物化學與分子生物學。由于其特殊性,該種試劑不得帶入公共實驗室,在各自實驗室進行專項管理或者由學院進行統一管理。不相容化學試劑一些化學試劑在儲存和操作過程中不能與其他物質接觸,否則就發生爆炸,這些化學試劑稱為不相容化學試劑。如疊氮化物通常用作溶液中的抗菌劑,由于輕微碰撞就可能造成疊氮化銅的爆炸,因此不能與銅接觸(如污水管及管道設施)。,分子生物學實驗安全常識,13化學試劑的安全使用,EB,EB是一種強誘變劑(可能造成遺傳性危害),直接接觸有中等毒性。EB可以通過皮膚吸收,因此應當避免一切與EB的直接接觸。EB對皮膚,眼睛,口腔和上呼吸道系統有刺激性作用。應將EB安全密封,并密閉存放于干燥避光處。,提取組織和細胞RNA的一種重要試劑,在提取RNA時一定要在通風櫥進行。如皮膚接觸TRIZOL,請立即用大量去垢劑和水沖洗,廢液埋入地下。,TRIZOL,分子生物學實驗安全常識,13化學試劑的安全使用,RNA酶的強抑制劑,一種潛在的致癌物質。操作時戴口罩,在通風櫥中進行。沾到手上立即沖洗,廢液通過廢液道排泄。,DEPCDIETHYLPROCARBONATE二乙基焦碳酸酯,常用于DNA和RNA提取,對皮膚、眼睛、黏膜和呼吸道有強烈的刺激作用和腐蝕性,易損害肝和腎。操作時戴手套在通風櫥里進行,廢液收集后埋入地下。,CHCL3(CHLOROFORM,氯仿),ACRYLAMIDE(丙烯酰胺),DNA測序、SSR及蛋白質分離等技術中作電泳支持物,具神經毒性,聚合后毒性消失。操作時戴手套在通風櫥內進行,聚合后的聚丙烯酰胺凝膠沒有毒性,可隨普通垃圾一起扔掉,千萬不要倒入下水道。,分子生物學實驗安全常識,13化學試劑的安全使用,DMSO(二甲亞砜),是一種既溶于水又溶于有機溶劑的非質子極性溶劑,常用作細胞的凍存液和配制AS。皮膚沾上之后用大量的水洗及15稀氨水洗滌。,有毒,易損害眼睛。質粒提取時作裂解液破壞細胞膜和SOUTHERN雜交時的洗膜液中的去垢劑。戴合適的手套和安全護目鏡,不要吸入其粉末。,十二烷基硫酸鈉SDS,強神經毒性,防止誤吸,操作時快速,存放時密封。,TEMED,分子生物學實驗安全常識,13化學試劑的安全使用,很強的還原劑,散發難聞的氣味??梢蛭?、咽下或皮膚吸收而危害健康。當使用固體或高濃度儲存液時,戴手套和護目鏡,在通風櫥中操作。,DTT二硫蘇糖醇,一種高強度毒性的膽堿酯酶抑制劑。它對呼吸道黏膜、眼睛和皮膚有非常大的破壞性??梢蛭?、咽下或皮膚吸收而致命。戴合適的手套和安全眼鏡,始終在化學通風櫥里使用。在接觸到的情況下,要立即用大量的水沖洗眼睛或皮膚,已污染的工作服作為有害廢物處理。,PMSF苯甲基磺酰氟,引起嚴重的眼睛刺激和灼傷??梢蛭?、咽下或皮膚吸收而受害。戴合適的手套和護目鏡。,TRITONX100,分子生物學實驗安全常識,13化學試劑的安全使用,對黏膜和上呼吸道組織、眼睛和皮膚有極大危害性。吸入可致命。操作時戴合適的手套、安全眼鏡和防護服。始終在通風櫥里操作,操作完后徹底洗手。,過硫酸銨NH42S2O8,毒性非常大。它阻斷細胞色素電子運送系統。含有疊氮鈉的溶液要標記清楚??梢蛭?、咽下或皮膚吸收而損害健康。戴合適的手套和安全護目鏡,操作時要格外小心。,疊氮鈉(NAN3),染料咽下可致命或引起眼睛失明,通過吸入和皮膚吸收是有毒的。其可能的危險是不可逆的效應。戴合適的手套和安全護目鏡。在化學通風櫥里操作,不要吸入其粉末。,吉姆薩(GIEMSA),分子生物學實驗安全常識,14微生物的危害及處理,,生物安全,,重點任務實驗室感染的控制、實驗室對周圍環境影響的控制以及實驗室和感染性實驗材料的管理控制。,分子生物學實驗安全常識,14微生物的危害及處理,動物病原微生物分類名錄(2005年農業部令第53號),第三類多種動物共患病病原微生物低致病性流感病毒、偽狂犬病病毒、破傷風梭菌、氣腫疽梭菌、結核分支桿菌、副結核分支桿菌、致病性大腸桿菌、沙門氏菌、巴氏桿菌、致病性鏈球菌、李氏桿菌、產氣莢膜梭菌、嗜水氣單胞菌、肉毒梭狀芽孢桿菌、腐敗梭菌和其他致病性梭菌、鸚鵡熱衣原體、放線菌、鉤端螺旋體。水生動物病病原微生物流行性造血器官壞死病毒、傳染性造血器官壞死病毒、馬蘇大麻哈魚病毒、病毒性出血性敗血癥病毒、錦鯉皰疹病毒、斑點叉尾鮰病毒、病毒性腦病和視網膜病毒、傳染性胰臟壞死病毒、真鯛虹彩病毒、白鱘虹彩病毒、中腸腺壞死桿狀病毒、傳染性皮下和造血器官壞死病毒、核多角體桿狀病毒、蝦產卵死亡綜合癥病毒、鱉鰓腺炎病毒、TAURA綜合癥病毒、對蝦白斑綜合癥病毒、黃頭病病毒、草魚出血病毒、鯉春病毒血癥病毒、鮑球形病毒、鮭魚傳染性貧血病毒。,分子生物學實驗安全常識,14微生物的危害及處理,高致病性動物病原微生物是指來源于動物的、動物病原微生物分類名錄中規定的第一類、第二類病原微生物。,第三類病原微生物是指能夠引起人類或者動物疾病,但一般情況下對人、動物或者環境不構成嚴重危害,傳播風險有限,實驗室感染后很少引起嚴重疾病,并且具備有效治療和預防措施的微生物。,采用遺傳工程技術人為設計出更多帶有新型遺傳物質的生物,既涉及到有生命活性的載體自身對實驗室人員的生物安全,還存在大量投放于環境后的生物污染問題此類問題造成的影響更是深遠而不易覺察。當考慮要構建或使用遺傳修飾生物時,對實驗室工作的危害度評估可能比從事遺傳學正常生物(未修飾)工作的危害度評估更為重要,不能僅憑經驗或未經驗證的文獻來評估此類生物的潛在危害。例如構建轉基因動物常用的逆轉錄病毒載體,重組將外源基因轉入體內的同時,伴隨有致病性增強的過程。必須經過驗證明確所必需的生物安全級別,并對供體生物的特性、將要轉移的核酸序列的性質、受體生物的特性以及環境特性做一綜合評估,才能確定遺傳修飾生物體所要求的生物安全水平,并做到安全操作目標基因。,14微生物的危害及處理,分子生物學實驗安全常識,重組核酸技術和生物安全,生物表達系統由符合一系列標準并可安全使用的載體和宿主細胞組成。如果所要插入的外源基因序列不要求更高級別的生物安全水平,大部分常規遺傳工程實驗可以按BSL1安全操作大腸桿菌工程菌。用于基因治療和有效轉移基因到組織培養細胞的病毒載體,大多是復制缺陷型的,但操作時應采用與構建這些載體時的親本病毒相同的生物安全水平。攜帶外源性遺傳信息的動物(轉基因動物)應當在靶基因編碼產物特性的防護水平下進行操作,定點缺失特性基因的動物(基因敲除動物)一般不表現特殊的生物危害?;虍a物是否具有潛在的藥理學活性是必須考慮的一項重要因素。比如,克隆、表達編碼毒素的基因就需要較高的生物安全水平,因為當采用病毒載體過量表達這些毒素蛋白時有可能產生難以預料的后果。危害度評估一種動態過程,必須密切跟蹤該生物因子研究的最新進展,一旦獲得載體/宿主的新信息時,需要隨時將相關工作歸入更高或更低的生物安全水平。,14微生物的危害及處理,分子生物學實驗安全常識,重組核酸技術和生物安全,放射性藥品使用后殘留和剩余部分被稱為放射性廢物。放射性廢物處理不當會造成環境的放射性污染,影響工作人員和周圍居民的健康。固體廢物的處理主要采用放置法,被放射性藥物污染的固體廢物應存在固定的指定地點并采用適當的屏蔽物加以防護,待其自然衰變后,當作非放射性廢物處理即可。如為過期的發生器吸附柱應標明日期并用塑料袋包裝后置于貯源室,待其自然衰變后再處理。,分子生物學實驗安全常識,15放射性物質的安全使用使用同位素,防護先行,基本任務和目的按照輻射防護的三項基本原則,即輻射事業的正當化、防護水平的最優化和個人劑量的限額化。,液體廢物的處理應根據放射性物質的最大容許濃度、化學性質、放射性強度、廢液的容積以及下水道的排水設備等情況進行不同的處理。一般采用放置法,半衰期短的也可用稀釋法達到容許排放水平。放射性強度低的廢水也可直接排入下水道,但其放射性濃度不得超過露天水源中限制嘗試的100倍。不能直接排入下水道的放射性廢液,可采用衰變池貯存十個半衰后排入下水道。注意未經固化處理的放射性廢液和濃縮物以及尚未選定最終處置方案的固化體等放射性廢物,都應在固定地點貯存在專用的容器中,貯存過程中注意安全,不能使反射性廢物泄漏。不同的比活度的廢物要求使用不同的貯罐。放射性廢物的轉運放射性廢物轉運的關鍵是廢物的包裝容器,事先要做好安全檢驗,對容器的強度、屏蔽防護、密封系統、包裝的標志等都有嚴格的規定。要求做到安全運輸,防止發生火災、容器顛覆及包裝破損而使放射性廢物泄漏,污染環境。,分子生物學實驗安全常識,15放射性物質的安全使用,分子生物學實驗安全常識,,16紫外線輻射的危害和防護,紫外輻射是指波長范圍在100NM400NM的光輻射,一般把100NM280NM稱作UVC,把280NM315NM稱作UVB,把315NM400NM稱作UVA。其中我們觀察膠體用的最多的就是280NM315NM的紫外線。紫外線的有害效應主要是由于紫外線對脫氧核糖核酸(DNA)的作用造成的。最有害的效應是細胞致死,其它的效應則包括致突、致癌、干擾DNA、核糖核酸(RNA)和蛋白質的合成、細胞分裂的延遲、以及在通透性和能動性上的變化等。1紫外光對眼睛的損傷白內障被認為過量紫外光輻射的主要原因,經紫外光照射后,射線大部分被角膜上皮細胞核蛋白吸收,導致細胞核膨脹,碎裂和細胞死亡,以至損傷眼角膜和晶狀體,導致渾濁??偟恼f來,紫外光輻射增加,人類的白內障患者增加。,分子生物學實驗安全常識,,16紫外線輻射的危害和防護,2、紫外光對人皮膚的損傷紫外光的影響有積累作用,它的主要機理蛋白質受紫外光照射后,形成光解產物,此外,其溶解度和粘度,對熱變性的敏感性及熒光等物理化學和光學性質均有顯著的改變。紫外光對皮膚的作用分為急性作用和慢性作用。急性作用表現為紅斑效應其癥狀為水腫脫皮,全身癥狀有寒戰,發燒,惡心,罕見循環衰竭。慢性作用如致皮膚老化,色素沉著,加速老化,甚至引起腫瘤。輕者皮膚出現水腫性紅斑,重者會出現水皰或大皰,還可伴有休克,發熱,畏寒,惡心,心悸和頭昏等癥狀。3、紫外光對其他部位的損傷紫外光輻射對免疫系統的影響,免疫系統的一些成分存在于皮膚中,皮膚暴露在紫外光下,使得免疫系統受紫外光輻射,使其功能受到干擾。研究表明,紫外光輻射的免疫抑制作用可導致皮膚癌,同時引起一些傳染病和其他一些疾病。,分子生物學實驗安全常識,16紫外線輻射的危害和防護,在實驗室里常用的紫外光源包括手提式紫外燈和紫外透射儀、凝膠成像系統。只能通過吸收有害波長的濾片或安全玻璃片才能觀察。在紫外光下操作時要戴合適的預防性手套。應佩戴具有紫外線防護功能的護目鏡和/或防護面罩,并遮蔽暴露的皮膚。建議使用熒光染料,切膠在DARKREADER上操作。DARKREADER熒光透射儀TRANSILLUMINATORS的特點1DARKREADER使用新的無毒DNA染料SYBRGREEN,SYBRGOLD等,避免了ETHIDIUMBROMIDEEB染料對人體的傷害。2DARKREADER使用可見光(400500NM),沒有UV(紫外線),將其對人體的傷害降低至零。同時,大大降低了對DNA樣本的損傷,克隆DNA的效率將成百倍的提高。3靈敏度高,遠遠高于UV檢測儀。4適用染料范圍廣;熒光素(FLUORESCEIN),ATTOPHOS,GELSTAR,VISTRAGREEN,SYPROORANGE,REDSHIFTEDGFPVARIANTS等都可使用。對于RHODAMINES,ETHIDIUMBROMIDEEB等激發光大于500NM的染料亦可適用;可以廣泛用于DNA、RNA以及蛋白質的檢測。5DARKREADER同時提供琥珀色鏡片的觀察眼鏡(AG16),供切割凝膠時使用。紫外照射消毒后由于空氣中臭氧富集,不宜立即開始工作,應在停止紫外照射30MIN后開始工作,有條件的實驗室,可安裝無臭氧紫外燈。超凈工作臺中進行紫外照射消毒后,也應用強風進行吹掃后再進行工作,以免臭氧危害身體健康。,分子生物學實驗安全常識,17廢棄物的處理,含有EB的廢棄物,分子生物學實驗安全常識,17廢棄物的處理,SIGMA公司ETHIDIUMBROMIDE/SYBR?GREENREPLACEMENTCARTRIDGES5REPLACEMENTCARTRIDGESFORDECONTAMINATIONOFSOLUTIONSCONTAININGETHIDIUMBROMIDEORSYBR?GREENBINDINGCAPACITYFORABOVEMENTIONEDFLUORESCENTSTAINS50MGPRICE約700RMB,QBIOGENE公司ETBRGREENBAG?DISPOSALTHEETBRGREENBAG?KITALLOWSRAPIDANDTROUBLEFREECONCENTRATIONOFETHIDIUMBROMIDEFROMLARGEVOLUMESOFSOLUTIONSINTOASMALL“TEABAG“WHICHISTHENCONVENIENTLYDISPOSEDALONGWITHOTHERSOLIDHAZARDOUSWASTESONEKITHASTHECAPACITYTOREMOVE500MGOFETHIDIUMBROMIDEFROMSOLUTIONS10MGETBR/BAGPRICE約1608RMB,含有EB的廢棄物,分子生物學實驗安全常識,17廢棄物的處理,含有微生物的廢棄物,大腸桿菌ESCHERICHIACOLI,ECOLI是人和許多動物腸道中最主要且數量最多的一種細菌,主要寄生在大腸內。它侵入人體一些部位時,可引起感染,如腹膜炎、膽囊炎、膀胱炎及腹瀉等。人在感染大腸桿菌后的癥狀為胃痛、嘔吐、腹瀉和發熱。感染可能是致命性的,尤其是對孩子及老人。該菌對熱的抵抗力較其他腸道桿菌強,55℃經60分鐘或60℃加熱15分鐘仍有部分細菌存活。在自然界的水中可存活數周至數月,在溫度較低的糞便中存活更久。大腸桿菌廢棄物應分類收集進行消毒、燒毀處理,對大腸桿菌廢棄物處理有如下方法1固體廢棄物固體含菌培養基及一次性使用廢棄物如槍頭、塑料管、手套、帽子、口罩等使用后放入專用垃圾袋內集中燒毀??芍貜屠玫牟A鞑娜缭嚬?、玻瓶等或塑料制品,可以先用朗索消毒片溶液浸泡3片/1000ML水,浸泡3小時以上,然后清洗,再高壓蒸汽滅菌后使用。2液體廢棄物液體含菌培養物加朗索消毒片處理后5片/1000ML水,浸泡3小時以上,根據菌液濃度可酌情增加消毒片劑量或延長浸泡時間或者直接將菌液煮沸30MIN后方可倒入下水道,切勿直接將未處理含菌廢液排入下水道。實驗室大腸桿菌多為帶抗性菌體,為防止實驗室大腸桿菌實驗廢棄物隨意排放對環境造成污染以及確保實驗室工作人員安全,請各實驗室積極配合,做好。,分子生物學實驗安全常識,17廢棄物的處理,?移液器吸頭使用過的移液器吸頭應放入含有10次氯酸鈉溶液的容器內浸泡,浸泡時間不宜少于24H。?PCR產物含有PCR產物的所有液體及廢棄物應放入含有1MOL/LHCL的容器中浸泡,浸泡時間不宜少于6H;采用PCRELISA方法檢測時洗板機洗板所產生的廢液應收集至1MOL/LHCL溶液中。?陽性樣品和質粒陽性質粒宜放入1MOL/LHCL溶液中浸泡,浸泡時間不宜少于6H。,分子生物學實驗操作常見廢棄物,分子生物學實驗安全常識,2分子生物學功能實驗室使用注意事項,414臺面長期臺面,每半年申請一次;短期臺面,每月申請一次;公共臺面,隨時有空即可用。注意事項臺面的衛生在每天的500PM檢查,每個課題組申請的臺面必須將臺面整理整齊,每個臺面各自的垃圾桶內的廢液、廢固已經帶離414公共臺面不設置垃圾桶,請各位使用公共臺面的研究人員自帶廢液缸,實驗結束后帶離。公共臺面實行抽檢制度。若出現臺面臟亂,按照公共平臺檢查制度及違規處罰條例進行處理。嚴重者將取消臺面使用權。不得將耗材等物品隨意放置在公共臺面上,做完實驗后請將各自物品帶離公共臺面。不得擅自開窗,進出實驗室請隨手關門。不得帶手套觸摸無污染區的所有物品。不得私自帶無通行證人員進入實驗室進行實驗。無通行證不得進入實驗室,大型儀器必須取得資格才能上機操作。必須遵守公共平臺的各項管理規定,特別是有關實驗室安全的管理規定。,THANKYOU,
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        上傳時間:2023-07-21
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      • 簡介:304512MOLECULARBIOLOGYANDRECOMBINANTDNATECHNOLOGY,MONTAROPYAMABHAI,SCHEDULETUE,TH10AM1PM,JULYTUE24THR26AUGUSTTUE7THR9,TOPIC,RECOMBINANTDNATECHNOLOGYJULY24,26BRIEFREVIEWOFMOLECULARBIOLOGYMOVIEHISTORYDNAANDPROTEINELECTROPHORESISDNASEQUENCINGPCRBASICBIOINFORMATICSGENETICENGINEERINGPLASMIDSVECTORDNALIBRARYSOUTHERNBLOTANALYSISPCRCLONINGMUTAGENESISTHESTUDYOFGENEEXPRESSIONSAUGUST7NORTHERN/WESTERNBLOTANALYSISMICROARRAYREPORTERFUSIONPROTEINS/IMMUNOLOCALIZATIONTRANSGENICANIMALMODERNMETHODSINMOLECULARBIOLOGYAUGUST9PRODUCTIONOFRECOMBINANTPROTEINSMOLECULAREVOLUTIONRNAITECHNOLOGYREALTIMEPCR,READING,MOLECULARCLONINGALABORATORYMANUALSAMBROOKC1999CELLANDMOLECULARBIOLOGYCONCEPTSANDEXPERIMENTS,5THEDITIONGERALDKARP,FORMERLYOFTHEUNIVOFFLORIDA,GAINESVILLEISBN9780470042175,?2008,864PAGES,EVALUATION,ASSIGNMENTS50SELECTACOMPANYTHATSALEANYBIOTECHPRODUCTSTHATYOULIKETHEN,WRITEA“PRODUCTREVIEW”DESCRIBINGTHISPRODUCTINASMUCHDETAILASPOSSIBLEBUTNOMORETHANONEA4PAGEEXAM50CLOSEBOOK,3HRS,RECOMBINANTDNATECHNOLOGY,BRIEFREVIEWOFMOLECULARBIOLOGYMOVIEDNAANDPROTEINELECTROPHORESISDNASEQUENCINGPCRBASICBIOINFORMATICSGENETICENGINEERINGPLASMIDSVECTORPCRCLONINGDNALIBRARYSOUTHERNBLOTANALYSISSITEDIRECTEDMUTAGENESIS,REVIEW,2006CRAIGCMELLOANDANDREWFIRESRECEIVEDANOBLEPRIZEFORRNAI,DNAANDPROTEINELECTROPHORESIS,AGAROSEGELELECTROPHORESISPOLYACRYLAMIDEGELELECTROPHORESISPAGEHTTP//GSLCGENETICSUTAHEDU/,GELELECTROPHORESIS,DNASEQUENCING,DIDEOXYMETHODAUTOMATEDDNASEQUENCING,,PCR,,BIOINFORMATICS,WHATISBIOINFORMATICSUSEFULWEBSITESTOOLSBIOLOGICALDATABASESSEQUENCEALIGNMENTSTRUCTURALBIOINFORMATICSMOLECULARPHYLOGENETICSGENOMICS/PROTEOMICS,WHATISBIOINFORMATICS,INTERDISCIPLINARYSUBJECTINVOLVINGCOMPUTERANDBIOLOGICALSCIENCES,THESCIENCEOFINFORMATICSASAPPLIEDTOBIOLOGICALRESEARCHINFORMATICSISTHEMANAGEMENTANDANALYSISOFDATAUSINGADVANCEDCOMPUTINGTECHNIQUESBIOINFORMATICSISPARTICULARLYIMPORTANTASANADJUNCTTOGENOMICSRESEARCH,BECAUSEOFTHELARGEAMOUNTOFCOMPLEXDATATHISRESEARCHGENERATESWWWFOODGOVUK/SCIENCE/OURADVISORS/TOXICITY/COTMEETS/49737/49750/49831THECOLLECTION,ORGANIZATIONANDANALYSISOFLARGEAMOUNTSOFBIOLOGICALDATA,USINGNETWORKSOFCOMPUTERSANDDATABASESWWWABCNETAU/SCIENCE/SLAB/GENOME2001/GLOSSARYHTMTHEPROCESSOFDEVELOPINGTOOLSANDPROCESSESTOQUANTIFYANDCOLLECTDATATOSTUDYBIOLOGICALSYSTEMSLOGICALLYWWWALSNET/ALS101/GLOSSARYASPTHEASSEMBLYOFDATAFROMGENOMICANALYSISINTOACCESSIBLEFORMSITINVOLVESTHEAPPLICATIONOFINFORMATIONTECHNOLOGYTOANALYZEANDMANAGELARGEDATASETSRESULTINGFROMGENESEQUENCINGORRELATEDTECHNIQUESWWWDOYLEFOUNDATIONORG/ICSU/GLOSSARYHTMTHEUSEOFCOMPUTERSINSOLVINGINFORMATIONPROBLEMSINTHELIFESCIENCESITMAINLYINVOLVESTHECREATIONOFEXTENSIVEELECTRONICDATABASESONGENOMES,PROTEINSEQUENCESETCALSOINVOLVESTECHNIQUESSUCHASTHREEDIMENSIONALMODELLINGOFBIOMOLECULESANDBIOLOGICALSYSTEMSWWWUNIVERSITYSCIENCEIE/PAGES/GLOSSARYPHPTHEUSEOFCOMPUTERSTOHANDLEBIOLOGICALINFORMATIONTHETERMISOFTENUSEDTODESCRIBECOMPUTATIONALMOLECULARBIOLOGY–THEUSEOFCOMPUTERSTOSTORE,SEARCHANDCHARACTERIZETHEGENETICCODEOFGENES,THEPROTEINSLINKEDTOEACHGENEANDTHEIRASSOCIATEDFUNCTIONSWWWSYNGENTACOM/EN/ABOUT_SYNGENTA/RESEARCH_TECH_GLOSSASPXABROADTERMTODESCRIBEAPPLICATIONSOFCOMPUTERTECHNOLOGYANDINFORMATIONSCIENCETOORGANIZE,INTERPRET,ANDPREDICTBIOLOGICALSTRUCTUREANDFUNCTIONBIOINFORMATICSISUSUSALLYAPPLIEDINTHECONTEXTOFANALYZINGDNASEQUENCEDATABIOMAGNIFICATIONAPROBLEMASSOCIATEDWITHTHEINTRODUCTIONOFXENOBIOTICCOMPOUNDSINTOTHEBIOSPHEREINWHICHTHECONCENTRATIONOFTHECOMPOUNDINCREASESASITPASSESUPTHEFOODCHAINWWWPLPAAGRIUMNEDU/SCAG1500/DEFINITIONSHTMLTHEFIELDOFSCIENCEINWHICHBIOLOGY,COMPUTERSCIENCE,ANDINFORMATIONTECHNOLOGYMERGEINTOASINGLEDISCIPLINEWWWEPAGOV/COMPTOX/GLOSSARYHTMLTHEFIELDOFBIOLOGYSPECIALIZINGINDEVELOPINGHARDWAREANDSOFTWARETOSTOREANDANALYZETHEHUGEAMOUNTSOFDATABEINGGENERATEDBYLIFESCIENTISTSWWWNIGMSNIHGOV/NEWS/SCIENCE_ED/GENETICS/GLOSSARYHTMLINFORMATIONABOUTHUMANANDOTHERANIMALGENESANDRELATEDBIOLOGICALSTRUCTURESANDPROCESSESPHARMACYUCSFEDU/GLOSSARY/I/ISRESEARCH,DEVELOPMENTORAPPLICATIONOFMATHEMATICALTOOLSANDAPPROACHESFOREXPANDINGTHEUSEOFBIOLOGICAL,MEDICAL,BEHAVIORALORHEALTHDATATHISINCLUDESMETHODSTOACQUIRE,STORE,ORGANIZE,ARCHIVE,ANALYZEORVISUALIZEDATAWWWMAYOUMINNESOTAPARTNERSHIPORG/GLOSSARYHTMLTHEUSEOFCOMPUTERSTOCOLLECT,ANALYZEANDSTOREGENOMICSINFORMATIONPBIIBPNRCCNRCGCCA/EN/MEDIA/GLOSSARYHTMTHEUSEOFCOMPUTERS,LABORATORYROBOTSANDSOFTWARETOCREATE,MANAGEANDINTERPRETMASSIVESETSOFCOMPLEXBIOLOGICALDATAWWWMEDUMICHEDU/GENETICS/GLOSSARY/THECOLLECTIONANDSTORAGEOFINFORMATIONABOUTGENOMICSINDATABASESWWWPUBACZA/RESOURCES/GLOSSARYHTMLTHEMANAGEMENTANDANALYSISOFDATAFROMBIOLOGICALRESEARCHWWWBIOTECHCA/EN/GLOSSARYHTMLDESCRIPTIONASCIENTIFICDISCIPLINETHATCOMPRISESALLASPECTSOFTHEGATHERING,STORING,HANDLING,ANALYSING,INTERPRETINGANDSPREADINGOFBIOLOGICALINFORMATIONINVOLVESPOWERFULCOMPUTERSANDINNOVATIVEPROGRAMMESWHICHHANDLEVASTAMOUNTSOFCODINGINFORMATIONONGENESANDPROTEINSFROMGENOMICSPROGRAMMESEUROPAEUINT/COMM/RESEARCH/BIOSOCIETY/LIBRARY/GLOSSARYLIST_ENCFMTHEDISCIPLINEOFOBTAININGINFORMATIONABOUTGENOMICORPROTEINSEQUENCEDATATHISMAYINVOLVESIMILARITYSEARCHESOFDATABASES,COMPARINGYOURUNIDENTIFIEDSEQUENCETOTHESEQUENCESINADATABASE,ORMAKINGPREDICTIONSABOUTTHESEQUENCEBASEDONCURRENTKNOWLEDGEOFSIMILARSEQUENCESDATABASESAREFREQUENTLYMADEPUBLICALLYAVAILABLETHROUGHTHEINTERNET,ORLOCALLYATYOURINSTITUTIONBIOINFOCNIOES/DOCUS/COURSES/SEK2003FILOGENIAS/SEQ_ANALYSIS/GLOSSARYHTMLANINTERDISCIPLINARYAREAATTHEINTERSECTIONOFBIOLOGICAL,COMPUTER,ANDINFORMATIONSCIENCESNECESSARYTOMANAGE,PROCESS,ANDUNDERSTANDLARGEAMOUNTSOFDATA,FORINSTANCEFROMTHESEQUENCINGOFTHEHUMANGENOME,ORFROMLARGEDATABASESCONTAININGINFORMATIONABOUTPLANTSANDANIMALSFORUSEINDISCOVERINGANDDEVELOPINGNEWDRUGSWWWISYEGATECHEDU/TG/PUBLICATIONS/ECOLOGY/EOLSS/NODE2HTMLTHEUSEOFCOMPUTERSINBIOLOGICALRESEARCHWWWEPIDAUROSCOM/CMS/EN/PHARMACOGENETICS/GLOSSARYHTMLUSEOFCOMPUTERSINTHEACQUISITIONANDANALYSISOFINFORMATIONRELATINGTOGENES,PROTEINSANDTHEIRSTRUCTURES,BIOLOGICALPATHWAYSANDDRUGSWWWSERENEXCOM/PAGE87THEORGANISATIONANDUSEOFINFORMATIONONBIOLOGICALANDMOLECULARSUBJECTSTHISINCLUDESORGANISINGBIOMOLECULARDATABASES,MANAGINGTHEQUALITYOFDATAINPUT,GETTINGUSEFULINFORMATIONOUTOFSUCHDATABASES,ANDINTEGRATINGINFORMATIONFROMDISPARATESOURCESONEAPPLICATIONOFBIOINFORMATICSISTOBRINGTOGETHERGENESEQUENCEDATEDWITHTHATABOUTTHEPHYSIOLOGICALFUNCTIONSOFTHEPROTEINSWHOSEPRODUCTIONTHEYSIMULATEWWWBIOTECHNOLOGYVICGOVAU/INFO/GLOSSARYASPTHEUSEOFCOMPUTERSANDINFORMATIONTECHNOLOGYTOSTOREANDANALYZENUCLEOTIDEANDAMINOACIDSEQUENCESANDRELATEDINFORMATIONWWWOUPCOM/UK/BOOKSITES/CONTENT/0199264724/STUDENT/GLOSSARYHTMACOLLECTIVETERMTHATDESIGNATESTHEUSEOFCOMPUTERSANDSPECIALIZEDSOFTWARETOANALYZEANDRETRIEVEDATAFROMGENOMICANDSCIENTIFICDATABASESWWWPAINCEPTORCOM/PAGEASPTHESTUDYOFCOLLECTING,SORTING,ANDANALYZINGDNAANDPROTEINSEQUENCEINFORMATIONUSINGCOMPUTERSANDSTATISTICALTECHNIQUESWWWBSCSORG/ONCO/GLOSSARYHTMTHESCIENCEOFMANAGINGANDANALYZINGBIOLOGICALDATAUSINGADVANCEDCOMPUTINGTECHNIQUESWWWPATIENTSHELPINGDOCTORSORG/PHD/DEFINITIONSBIOINFORMATICSORCOMPUTATIONALBIOLOGYISTHEUSEOFTECHNIQUESFROMAPPLIEDMATHEMATICS,INFORMATICS,STATISTICS,ANDCOMPUTERSCIENCETOSOLVEBIOLOGICALPROBLEMSRESEARCHINCOMPUTATIONALBIOLOGYOFTENOVERLAPSWITHSYSTEMSBIOLOGYMAJORRESEARCHEFFORTSINTHEFIELDINCLUDESEQUENCEALIGNMENT,GENEFINDING,GENOMEASSEMBLY,PROTEINSTRUCTUREALIGNMENT,PROTEINSTRUCTUREPREDICTION,PREDICTIONOFGENEEXPRESSIONANDPROTEINPROTEININTERACTIONS,ANDTHEMODELINGOFEVOLUTIONENWIKIPEDIAORG/WIKI/BIOINFORMATICS,USEFULSERVERWEBSITES,USANCBIHTTP//WWWNCBINLMNIHGOV/EUROPEEBIHTTP//WWWEBIACUK/GOOGLESEARCHWWWGOOGLECOM,TOOLS,BIOINFORMATICSOFTWAREBUYFROMCOMPANYFREEWEBBASEDSOFTWAREDNASEQUENCEANALYSISPRIMERDESIGNDNATRANSLATIONTOOLSSTRUCTUREPREDICTIONRESTRICTIONSITEANALYSISSEQUENCEALIGNMENTSETC,BIOLOGICALDATABASES,PRIMARYDATABASESECONDARYDATABASESPECIALIZEDDATABASE,PRIMARYDATABASE,RAWNUCLEICACIDSEQUENCEGENBANKEMBLDDBJUSEDIFFERENTFORMATTOPRESENTDATATHESEDATABASESARECLOSELYCONNECTEDANDEXCHANGEDDATADAILY3DSTRUCTUREPDBPROTEINANDNUCLEICACIDSTRUCTUREATOMICCOORDINATESFROMXRAYANDNMR,SECONDARYDATABASE,COMPUTATIONALPROCESSEDINFORMATIONPROVIDESEQUENCEANNOTATIONSWISSPROTTREMBLTRANSLATEDNUCLEICACIDSEQUENCEFROMEMBLOTHERUNIPORT,PFAM,BLOCKS,DALI,SPECIALIZEDDATABASE,FOCUSONPARTICULARORGANISMSFLYBASEWORMBASEACEDB,TAIRFOCUSONFUNCTIONALANALYSISGENBANKESTMICROARRAYGENEEXPRESSIONDATABASE,IMPORTANT,MANYDATABASEARECONNECTEDNCBIAREMOSTINTEGRATEDRELIABILITYTHEREAREMANYERRORSINTHEDATABASESEQUENCINGERRORESPECIALLYBEFORE1990SREDUNDANCYNONREDUNDANTDATABASEUNIGENECOALESCEEST,INFORMATIONRETRIEVAL,USEBOOLEANOPERATIONJOINASERIESOFKEYWORDSTEXTBASEDSEARCHPROVIDEACCESSTOMULTIPLEDATABASEFORRETRIEVALOFINTEGRATEDSEARCHRESULTENTREZNCBISRSSEQRETRIVALSYSTEMFROMEBI,SEQUENCEALIGNMENT,HEARTOFBIOINFORMATICANALYSISACONSEQUENEOFEVOLUTIONHELPTOIDENTIFYEVOLUTIONRELATIONSHIP,SEQUENCEHOMOLOGY≠SEQUENCESIMILARITY,SEQUENCEHOMOLOGYISA“QUANTITATIVETERMSHOWINGCOMMONEVOLUTIONORIGINSEQUENCESIMILARITYISA“QUANTITATIVETERM”CALCULATINGFROMSEQUENCEALIGNMENTSIMILARITYFROMSIMILARITYONECANCONCLUDETHATTHESEQUENCEISHOMOLOGORNONHOMOLOG,SEQUENCESIMILARITYCLUSTALW,CLUSTALXTCOFFEEPOAPRALINEPRRN,ETCEDITINGBIOEDITRASCAL,IMPORTANT,NOALIGNMENTPROGRAMISPERFECTCOMBINERESULTSFROMMULTIPLEPROGRAMTHEALIGNMENTSHOULDBEREFINEMANUALLYPROTEINSEQUENCEALIGNMENTISMOREACCURATEANDSHOULDBEALIGNEDFIRST,PREDICTIONOFGENEANDPROMOTER,VERYDIFFICULTPROKAROTICGENOMESAREMUCHEASIERTOPREDICTTHEGOODPROGRAMISBEINGDEVELOPEDGENEMARKGLIMMER,MOLECULARPHYLOGENETIC,EVOLUTION,DEVELOPMENTOFBIOLOGICALFORMFROMPREEXISTINGFORMTHROUGHNATURALSELECTIONANDMUTATIONPROTEINORDNASEQUENCEAREMOLECULARFOSSILS,,,NATURE392917920,1998,MAJORASSUMPTIONS,MOLECULARSEQUENCESUSEDINPHYLOGENETICCONSTRUCTIONAREHOMOLOGOUSEVOLUTIONARYTREEISALWAYSBINARYEACHPOSITIONINASEQUENCEEVOLVEINDEPENDENTLY,TYPESOFPHYLOGENETICTREES,STEPS,CHOOSINGMOLECULARMARKERSPERFORMINGMULTIPLESEQUENCEALIGNMENTCHOOSINGAMODELOFEVOLUTIONDETERMININGATREEBUILDINGMETHODASSESSINGTREERELIABILITY,SELECTIONOFMOLECULARMARKERS,FORCLOSELYRELATEDORGANISMSINDIVIDUALWITHINPOPULATIONS,DNASEQUENCEISUSED,ASITEVOLVESFASTFORMOREWIDELYDIVERGENTGROUPDIFFERENTSPECIESOFBACTERIA,FUNGIUSESLOWLYEVOLVINGSEQUENCESUCHASRIBOSOMALRNAORPROTEINFORGREATLYDIFFERENTORGANISMSBACTERIAANDE
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      • 簡介:緒論,生物化學與分子生物學定義與其他學科關系發展簡史實際應用,什么是生物化學,簡單說,生物化學是生命的化學。生物化學是用化學的理論和方法作為主要手段,研究生物體的基本物質的結構(如CARBOHYDRATES,LIPIDS,PROTEINSANDNUCLEICACID、性質及其生命活動的變化規律(生命活動如生長、生殖、代謝、運動等),是研究生物體的化學組成與性質(靜態生化,STATICBIOCHEMISTRY,以及機體內所進行的化學變化DYNAMICBIOCHEMISTRY的科學。,分子生物學是研究核酸、蛋白質等所有生物大分子的形態、結構特征及其重要性、規律性和相互關系的科學。分子生物學MOLECULARBIOLOGY是生物化學的重要組成部分。,生物化學與分子生物學同有關學科的關系,生物化學與分子生物學是生物學的最深層次;生物化學與分子生物學是化學的最高層次;生物化學與分子生物學為農學、醫學和食品科學提供理論依據和研究手段;物理學、信息科學和數學為生物化學與分子生物學提供研究手段。,與生物化學的關系最為密切,但存在一定的差別,分子生物學的三大原則,1構成生物大分子的單體是相同的共同的核酸語言共同的蛋白質語言,2生物遺傳信息表達的中心法則相同,DNA,RNA,3生物大分子單體的排列(核苷酸、氨基酸)的不同,,不同的高級結構不同的生物大分子之間的互作,,不同的物種特性,,,準備和醞釀階段時間19世紀后期到20世紀50年代初。兩點重大突破確定了蛋白質是生命的主要基礎物質;確定了生物遺傳的物質基礎是DNA。,現代分子生物學的建立和發展階段,時間從50年代初到70年代初,1953年WATSON和CRICK的DNA雙螺旋結構模型作為現代分子生物學誕生的里程碑。主要進展包括遺傳信息傳遞中心法則的建立對蛋白質結構與功能的進一步認識,初步認識生命本質并開始改造生命的深入發展階段,時間70年代后-至今基因工程技術作為新的里程碑,標志著人類深入認識生命本質并能動改造生命的新時期開始。,生物化學中的關鍵技術,電泳(1923)生物大分子的分離、分析超離心(1925)蛋白質、細胞亞器官的分離;分子量的確定同位素標記(1934)物質代謝途徑、生物大分子結構測定層析(1944)生物大分子的分離純化X光衍射、NMR生物大分子結構測定,超速離心(1920S)電泳(1930S)電鏡(1930S)同位素示蹤(1940S)柱層析(1940S)X射線衍射(1950S)氨基酸分析與測序(1950S)核酸雜交(1960S)核苷酸測序(1970S)重組DNA技術(1970S)DNA合成(1980S)單克隆抗體組織化學(1980S)聚合酶鏈式反應(1980S),分子生物學常用技術,19012012111項生理醫學諾貝爾獎中,69項(62)頒給了生物化學與分子生物學領域,發展歷程,分子生物學中重大成就與突破者---NOBELPRIZE的獲得者---構成了分子生物學發展的主要內容---里程碑,1910科賽爾KOSSEL(德),蛋白質、細胞及細胞核化學的研究(首先分離到A、T和組氨酸),1958萊德伯格LEDERBERG(美)噬菌體轉導,比德爾BEADLE提出了堿基配對是核酸復制、遺傳信息傳遞的基本方式;最后確定了核酸是遺傳的物質基礎;為認識核酸與蛋白質的關系及其在生命中的作用打下了最重要的基礎。,,1962肯德魯KENDREW&佩魯茨PERUTZ(英國),KENDREW,PERUTZ,測定了肌紅蛋白及血紅蛋白的高級結構(三級),成為研究生物大分子結構的先驅,1965雅各布JACOB&莫諾MONOD(法國),提出并證實了OPERON作為調節細菌細胞代謝的分子機制首次提出MRNA分子的存在,1969NIRENBERG(美)HOLLY&KHORANA,尼倫伯格NIRENBERG,克拉納KHORANA,霍利HOLLEY,破譯了遺傳密碼,酵母PHETRNA的核苷酸序列并證明了所有TRNA三級結構的相似性,第一個合成了核酸分子,并人工復制了酵母基因,1975TEMIN,BALTIMORE美THISPHOTOGRAPHREQUIREDA24HOUREXPOSURETHEREALPOINTTHATTHISTECHNOLOGYALLOWSTHEINTRODUCTIONOFNEWTRAITSINTOPLANTSISNEVERTHELESSELEGANTLYMADE,煙草表達螢火蟲熒光素基因,表達抗蟲基因的西紅柿,GLYPHOSATERESISTANTSOYBEANPLANTSTHEPHOTOGRAPHSSHOWTWOAREASOFASOYBEANFIELDINWISCONSINAWITHOUTGLYPHOSATETREATMENT,THISPARTOFTHEFIELDISOVERRUNWITHWEEDSBGLYPHOSATERESISTANTSOYBEANPLANTSTHRIVEINTHEGLYPHOSATETREATEDSECTIONOFTHEFIELDGLYPHOSATEBREAKSDOWNRAPIDLYINTHEENVIRONMENTAGRICULTURALUSEOFENGINEEREDPLANTSSUCHASTHESEPROCEEDSONLYAFTERCONSIDERABLEDELIBERATION,BALANCINGTHEEXTRAORDINARYPROMISEOFTHETECHNOLOGYWITHTHENEEDTOSELECTNEWTRAITSWITHCAREBOTHSCIENCEANDSOCIETYASAWHOLEHAVEASTAKEINENSURINGTHATTHEUSEOFTHERESULTANTPLANTSHASNOADVERSEIMPACTONTHEENVIRONMENTORONHUMANHEALTH,轉草甘膦基因大豆,CLONINGINMICETHEGENEFORHUMANGROWTHHORMONEWASINTRODUCEDINTOTHEGENOMEOFTHEMOUSEONTHERIGHTEXPRESSIONOFTHEGENERESULTEDINTHEUNUSUALLYLARGESIZEOFTHISMOUSE,表達人生長激素的老鼠,噴灑工程菌清除石油污染,美國GE公司構造成功具有巨大烴類分解能力的工程菌,并獲專利,用于清除石油污染。,生化與司法鑒定,司法鑒定是健全法制中的一個必需的工作環節,它包含了法律上要鑒定的一切事、屋和人。受傷與死亡現象中的生化ADNA含量隨死亡時間而下降B心肌丁二酸脫氫酶、細胞色素氧化酶隨死亡時間而上升C精子DNA,DNA指紋技術的應用,親子鑒定(VNTR),,親子鑒定風行意大利(幾十萬),現代家庭“情流感”,犯罪分析,血液、唾液、頭發、精液和其他出現在犯罪現場的樣品成為嫌疑犯被監禁或釋放強有力的證據,誤差率在百萬分之一以下,結果非常精確。,,,,DNA身份證,,個人DNA基因身份證,第一章生物大分子的提取、沉淀和離心分離,第一節生物大分子的提取,蛋白質(包括酶),核酸,脂類,糖類等生物大分子的制備分四個階段一選擇材料和預處理二細胞的破碎及細胞組分的分離三提取和純化四濃縮,干燥和保存,一選擇材料及預處理動物,植物,微生物都可作為制備生物大分子的原材料,所選用的材料主要依據試驗目的來確定。有效成份是指欲純化的某種單一的生命大分子物質。而有效成分以外的其它物質則統稱雜質。,1動物組織選材必須選擇有效成分含量豐富且易分離的臟器組織為原材料。脫脂臟器中含量較高的脂肪,容易氧化酸敗,導致原料變質影響純度操作和制品的率。保存對預處理好的材料,若不立即進行實驗,應冷凍保存。A冰凍剝去脂肪和筋皮等結締組織,短期保存-10℃的冰箱內;長期保存-70℃低溫冰箱內。B干燥對于像腦垂體一類小組織,可置丙酮液中脫水,干燥后磨粉儲存備用;對于含耐高溫有效成分(如肝素)的腸粘膜,可在沸水蒸煮處理,烘干后能長期保存。,2植物材料選材注意植物品種和生長發育狀況不同,其中所含生物大分子的量變化很大,另外與季節性關系密切。A提取核DNA選用黃化苗(生長7-10天小麥,水稻),防止葉綠體DNA的干擾B提取RNA根據實驗目的選用生長幼嫩組織為好。保存冷凍采樣后盡快放于-4℃20℃冰箱內。DNA,RNA采樣后,N2速凍,至-70℃冰箱。對RNA樣,如不立即使用,冷凍保存尤為重要。,3微生物選材應注意它的生長期,在微生物的對數生長期,酶和核酸的含量較高,可以獲得高產量,以微生物為材料時有兩種情況A利用微生物菌體分泌到培養基中的代謝產物和胞外酶等。一般用離心法收集上清液,上清液只能在低溫下短期保存B利用菌體含有的生化物質,如蛋白質,核酸和胞內酶等。需破碎菌體細胞分離,濕菌體可低溫短期保存,凍干粉可在4℃保存數月。3,二確定測定方法在效成分在原材料中含量較低,純化是使其純度增高的過程,因此,提取和分離的每個步驟均要測定有效成分的含量。測定方法要專一、準確、靈敏和簡便。使用較多的測定方法有分光光度法、熒光分析法、生物活性如酶活力、激素活性測定、電泳分析等,有時可用電化學法和免疫分析法。,三細胞的破碎1機械破碎1研磨法剪碎的動物組織如鼠肝、兔肝等置研缽中,用研磨棒研碎。為了提高研磨效果,可加入一定量的石英砂。用勻漿器處理,也能破碎動物細胞。細菌和植物組織的細胞破碎均可用此法。,2組織搗碎器法用搗碎器轉速800010000R/M處理3045S可將植物和動物細胞完全破碎。但是在搗碎期間必須保持低溫,搗碎的時間不易太長,以防溫度升高引起有效成分變性?,F在多用細胞破碎儀。3超聲波法借助聲波的震動力破碎細胞壁和細胞器的有效方法。多用于微生物細胞的破碎,常采用間歇處理和降低溫度的方法進行。,4壓榨法是一種溫和、徹底破碎細胞的方法。用30MPA左右的壓力迫使幾十毫升細胞懸液通過一個小孔<細胞直徑的孔,致使其被擠破、壓碎。5凍融法將細胞置低溫下冰凍一定時間,然后取出置室溫下或40℃左右迅速融化。如此反復凍融多次,細胞可在形成冰粒和增高剩余胞液鹽濃度的同時,發生溶脹、破碎。,2溶漲和自溶溶漲細胞膜為天然的半透膜,在低滲溶液如低濃度的稀鹽溶液中,由于存在滲透壓差,溶劑分子大量進入細胞,引起細胞膜發生脹破的現象稱溶脹。例如紅血球置清水中會迅速溶脹破裂并釋放出血紅素。自溶細胞結構在本身所具有的各種水解酶如蛋白酶和酯酶等作用下,發生溶解的現象稱自溶。應用此法時要特別小心操作,因為水解酶不僅可使細胞壁、細胞膜破壞,同時也可將某些有效成分在自溶時分解。3化學處理用脂溶性的溶劑如丙酮、氯仿、甲苯或表面活性劑如十二烷基磺酸鈉、十二烷基硫酸鈉處理細胞時,可將細胞壁、細胞膜的結構部分溶解,進而使細胞釋放出各種酶類或DNA等物質,并導致整個細胞破碎。,4生物酶降解生物酶如溶菌酶有降解細菌細胞壁的功能。在用此法處理細菌細胞時,先是細胞壁消解,隨之而來的是因滲透壓差引起的細胞膜破裂,最后導致細胞完全破碎。例如從某些細菌細胞提取質粒DNA時,不少方法都采用了加溶菌酶來自蛋清破壞細胞壁的步驟。當有些細菌對溶菌酶不敏感時,可加巰基乙醇(ME)或者8MOL/L的尿素,以促進細胞壁的消化。另外,也可加入蛋白酶K來提高破壁效果。,四抽提1抽提的含義抽提通常是指用適當的溶劑和方法從原材料中把有效成分分離出來的過程。經過處理的原材料中的有效成分可用緩沖液、稀酸、稀堿、或有機溶劑(如丙酮、乙醇)等抽提,有時還可用蒸餾水抽提。一般理想的抽提液應具備下述條件對有效成分溶解度大,破壞作用??;對雜質不溶解或溶解度很??;來源廣泛、價格低廉、操作安全等。,2抽提的影響因子在抽提階段,PH值、金屬離子、溶劑的濃度和極性等因子,可明顯影響有效成分的性質和數量。因此選擇抽提液必須考慮這些因素。(1)PH值改變溶質解離狀態。對蛋白質或酶等具有等電點的兩性電解質物質,一般選擇抽提液的PH值應在偏離等電點的穩定范圍內。通常堿性蛋白質選用低PH值的溶液抽提,酸性蛋白質選用高PH值的溶液抽提。,2溶劑的極性和離子強度有些生物大分子在極性大、離子強度高的溶液中穩定;有些則在極性小、離子強度低的溶液中穩定。例如提取刀豆球蛋白A時,用015MOL/L甚至更高濃度的NACL溶液,都可使其從刀豆粉中溶解出來,穩定存在。而抽提脾磷酸二酯酶時,則需用02MOL/L蔗糖水溶液。一種物質溶解度大小與溶劑性質密切相關(相似相溶原理);離子強度通過影響溶質的帶電性也影響溶質的溶解度。降低極性在水溶液中加蔗糖,甘油,二甲亞砜,二甲基甲酰氨。,提高離子強度在水溶液中加中性鹽(KCL,NACL,NH4CL,NH42SO4)一般離子強度較低的中性鹽溶液可促進蛋白溶解(鹽溶),高離子強度的中性鹽可引起蛋白質沉淀,析出(鹽析)。高離子強度使DNA溶解度增加;低離子強度使RNA溶解度增加(核酸分離依據)。常用的鹽溶液是NACL溶液,濃度以015MOL/L為宜。但是在提取核蛋白或細胞器中的蛋白質時,為促使蛋白質與核酸、蛋白質與細胞器分離,則宜用高濃度0520MOL/L的鹽溶液。,3水解酶細胞破裂后,許多水解酶釋放出來。水解酶與欲抽提的蛋白質或核酸接觸時,一旦條件適宜,就會發生反應,導致蛋白質或核酸分解,而使實驗失敗。為此,必須采用加入抑制劑,調節抽提液的PH、離子濃度或極性等方法,使這些酶喪失活性。如提取,純化胰島素時,為阻止胰蛋白酶活化,采用68%的乙醇溶液(PH2530,用草酸調節),在13-15℃抽提3H,可得到較高的回收率。因為68%乙醇可使胰蛋白酶暫時失活,草酸可除去蛋白酶的激活劑CA2,酸性環境也抑制酶蛋白活性。RNA提取需防止RNASE的水解作用,RNASE活性很高,4溫度一般認為蛋白質或酶制品在低溫如0℃左右時最穩定。例如在生產人絨毛膜促性腺激素HCG,糖蛋白制品時,一定要在低溫下進行。當溫度低于8℃時,從200公斤孕婦尿中可提取約100克HCG粗品活力為160U/MG;當溫度高于20℃時,從400公斤孕婦尿中都提取不到100克粗品,而且活力很低。此外,高溫下制備的HCG粗品很難進一步純化至3500U/MG,原因是高溫會使HCG受到微生物和/或糖苷酶的破壞。一般提高溫度,溶解度增加,但易使大分子物質變性失活。小分子物質50-70℃;生物大分子0-10℃,最好控制在0-4℃,(5)攪拌攪拌能促使欲抽提物與抽提液的接觸,并能增加溶解度。但是,一般宜采用溫和的攪拌方法,速度太快時容易產生泡沫,導致某些酶類變性失活。(6)氧化一般蛋白質都含相當數量的巰基,該基團常常是酶和蛋白質的必須基團,若抽提液中存在氧化劑或氧分子時,會使巰基形成分子內或分子間的二硫鍵,導致酶或蛋白質失活或變性。在提取液中加入巰基乙醇,半胱氨酸。還原性谷胱甘肽等還原劑,可防止巰基發生氧化,使蛋白,酶失活。,(7)金屬離子蛋白質的巰基還能和金屬離子如鉛、鐵或銅作用,產生沉淀復合物。這些金屬離子主要來源于制備緩沖液的試劑中。解決的辦法①用無離子水或重蒸水配制試劑;②在配制的試劑中加入13MMOL/L的EDTA金屬離子絡合劑。(8)抽提液與抽提物的比例在抽提時,抽提液與抽提物的比例要適當,一般以5∶1為宜。如抽提液過多,則有利于有效成分的提取,但不利于純化工序的進行。,第二節沉淀分離技術,沉淀法也稱溶解度法,其純化生物大分子的原理是根據物質的結構差異(如蛋白質分子表面疏水基團和親水基團比例的差異)來改變溶液的某些性質(如PH值、極性、離子強度、金屬離子等),使抽提液中有效成份的溶解度發生變化,從而達到從抽提液中分離有效成份的目的。蛋白質和核酸在組成、結構及性質等方面有明顯差異,所以制備這兩種大分子時,所用的試劑和操作方法也不完全相同。,一蛋白質的沉淀分離,(一)鹽析沉淀法1鹽析的原理定義一般在低鹽濃度的情況下,蛋白質的溶解度隨鹽濃度的升高而增加,這種現象稱為鹽溶;而當鹽濃度升高到一定程度后,蛋白質的溶解度又隨著鹽濃度的升高而降低,結果使蛋白質沉淀析出,這種現象稱為鹽析作用。在同一濃度的鹽溶液中,不同蛋白質的溶解度不同,借此可達到彼此分離的目的。,2021年10月4日星期一,SWAU,,,,2鹽的選擇蛋白質的鹽析通常采用中性鹽,如硫酸銨、硫酸鈉、硫酸鎂、氯化鈉、磷酸鈉等,其中應用最廣的是硫酸銨。硫酸銨是一中性鹽,對蛋白質有相當好的安定作用。硫酸銨在水中的溶解度大而溫度的影響小25℃時溶解度為41MOL/L,即767G/L0℃時溶解度為37MOL/L,即697G/L,而且價廉易得,不易引起蛋白質變性,分離效果比其他鹽好。但是用硫酸銨鹽析時,緩沖能力較差,而且銨離子會干擾蛋白氮的測定,故有時也要用其他鹽來進行鹽析。磷酸鉀和硫酸鈉的鹽析系數KS較大,但由于在較低溫度下的溶解度太低,受溫度影響大,故應用不廣泛。,3硫酸銨濃度的計算與調整方法通常硫酸銨的添加以百分飽和度來表示不是濃度百分比,例如大部分蛋白質可在80硫酸銨飽和度下沉淀。因為硫酸銨加入的體積很大,會改變最后的總體積,很難由濃度百分比來計算,因此使用百分飽和度作為沉淀蛋白質的度量。用硫酸銨進行鹽析時,蛋白質溶液中硫酸銨濃度的調整方法主要有二種(1)加入飽和溶液法要求蛋白質溶液體積不大,所需調整的硫酸銨濃度不高VV0S2S1/(1S2)V所需加進的飽和硫酸銨溶液的體積;V0原溶液體積;S2所需達到的硫酸銨飽和度;S1原溶液的硫酸銨飽和度。飽和硫酸銨的配制方法在一定量的水中加入過量的硫酸銨,加熱至50-60℃,趁熱濾去沉淀,再在0℃或室溫平衡1-2天,有固體析出時達100%飽和度。,2加入固體鹽法要求飽和度高,不增大溶液體積TGS2S1/(1AS2)S2,S1分別代表所需達到的硫酸銨飽和度和原溶液的硫酸銨飽和度;T將1LS1飽和度的溶液提高到S2飽和度時所需加進的硫酸銨克數;G,A常數,與溫度有關。實際使用時,T可直接查表得到。(注意0℃,25℃兩張表,室溫用25℃),4影響蛋白質鹽析的因素(1)蛋白質濃度蛋白質濃度高時,欲分離的蛋白質常常夾雜著其他蛋白質一起沉淀出來(共沉現象)。因此在鹽析前要加等量生理鹽水稀釋,使蛋白質含量在25-30G/L。(2)離子強度和離子類型的影響A離子強度增加,溶解度下降,鹽析易發生B不同蛋白質鹽析時所需離子強度不同,可采用分步鹽析,通過逐步增加離子強度,使不同蛋白分步沉淀出來C離子強度相同時,高價離子,半徑小的離子鹽析力強,(3)PH的影響大多數蛋白質在等點電時,在鹽溶液中的溶解度最低。所以鹽析時溶液PH值調到等電點效果最好。(4)溫度的影響A在低離子強度或純水中,溫度升高,溶解度增加;B在高鹽溶液中,溫度升高,溶解度降低。一般在室溫下進行鹽析溫度敏感的蛋白質在低溫4℃進行也有個別酶在低溫時失活,高溫有活性,如血紅蛋白、肌紅蛋白、清蛋白在25℃比0℃時溶解度低,更容易鹽析。,5鹽析時的注意事項(1)添加的硫酸銨的純度要高,添加后,要放30MIN以上使其充分溶解,且要不斷攪拌,防止局部過濃,發生共沉淀;(2)同一溶液中欲分離幾種蛋白質時,可采用分段鹽析的方法。鹽析通常與等電點沉淀法配合使用。(3)選擇好溫度,一般在室溫下進行;(4)蛋白濃度不易過高,一般25-30G/L;低濃度鹽析,可用離心分離;高濃度鹽析(70-80%),用過濾(因為粘度大,離心操作慢);鹽析沉淀得到的蛋白質含量較高,純品需經脫鹽處理,如透析,凝膠過濾等。,(二)等電沉淀法利用蛋白質在等電點時溶解度最低以及不同的蛋白質具有不同等電點一這特性,對蛋白質進行分離純化的方法稱為等電點沉淀法。,(三)有機溶劑沉淀法作用機理(1)降低水溶液的介電常數,使溶質溶解度降低;(2)破壞大分子周圍水膜,使溶解度降低。利用不同蛋白質在不同濃度的有機溶劑中的溶解度不同而使蛋白質分離的方法,稱為有機溶劑沉淀法。經常使用的有機溶劑是乙醇和丙酮。優點比鹽析法析出的沉淀容易過濾或離心分離,分辨力比鹽析法好,溶劑也容易除去。,缺點有機溶劑沉淀法易使蛋白質和酶變性,所以操作必須在低溫條件下進行。蛋白質和酶沉淀分離后,應立即用水或緩沖液溶解,以降低有機溶劑濃度,避免變性。有機溶劑沉淀法一般與等電點沉淀法聯合使用。即操作時溶液的PH值應控制在欲分離蛋白質的等電點附近。,注意(1低溫操作(2)樣品濃度過大,易變性,共沉淀作用大,分離效果差;過小,易產生變性,回收率低。(3)樣品穩定結構范圍內,選擇溶解度最低處的PH,即與等電點共沉淀結合使用。(4注意離子強度,離子種類的影響。,(四)選擇性變性沉淀法選擇一定的條件使溶液中存在的某些雜蛋白變性沉淀而不影響所需蛋白質的方法稱為選擇性變性沉淀法。例如利用加熱,改變PH或加進某些重金屬離子等使雜蛋白變性沉淀而除去。應用此法,應對欲提純蛋白質和雜蛋白的理化性質有較全面的了解。,(五)非離子多聚物沉淀法聚乙二醇(PEG),葡聚糖,右旋糖苷硫酸鈉等非離子多聚物可以沉淀蛋白質和細菌。沉淀機理空間位置排斥效應。試劑溶解度大,在水中占據大部分空間,將需沉淀物相互靠近,增加碰撞機率。優點(1)操作條件溫和,不易引起變性;(2)具有極高的沉淀效率;(3)沉淀后多聚物容易除去。,二核酸的提取與沉淀分離,核酸類化合物都溶于水而不溶于有機溶劑。所以核酸可用水溶液提取,而用有機溶劑沉淀法沉淀分離。從生物材料中分離出的DNA和RNA,往往是以DNA蛋白質(DNP)或RNA蛋白質(RNP)復合物形式存在。因此,要制備初步純化的核酸時,首先要分離出DNP或RNP,再將復合物解聚,除去蛋白質,然后通過沉淀法得到核酸。DNP在014MOL/L的氯化鈉溶液中,RNP的溶解度相當大,而DNP的溶解度僅為在水中溶解度的1;當氯化鈉的濃度達到1MOL/L的時候,RNP的溶解度小,而DNP的溶解度比在水中的溶解度大2倍。所以常選用014MOL/L的氯化鈉溶液提取RNP,而選用1MOL/L的氯化鈉溶液提取DNP。,DNP,1DNP/RNP復合物的解聚主要采用加入去污劑、有機溶劑和蛋白水解酶等試劑來實現。去污劑在破碎細胞的溶液中,加入適量的陰離子去污劑SDS、TRITONX100、TWEEN40和NP40等,有利于膜蛋白和脂肪溶解,將DNP/RNP復合物解聚,進而釋放出核酸。有機溶劑苯酚、氯仿等是蛋白質的變性劑。根據抽提液中蛋白質的含量和溶劑的純度,用變性劑反復處理抽提液,直到離心后,上層水相(含核酸)和下層有機相之間的界面處無變性蛋白為止。蛋白水解酶用此法除去復合物中的蛋白質的操作比較溫和,常用的水解酶有溶菌酶、蛋白酶K和蛋白酶E,可以避免剪切和破壞核酸。,2多糖的消除采用動物或植物作材料提取核酸時,動物在宰殺前饑餓12H,植物在取材前暗室培養數天,其體內的糖原和淀粉類物質均會減少?;祀s于核酸提取液中的多糖類物質,一般可用選擇性沉淀劑如異丙醇、十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)可達到分離目的?;蛴玫润w積的25MOL/L磷酸緩沖液和等體積的乙二醇甲醚處理,離心后,多糖位于中部,核酸存在上層乙二醇甲醚中。,3RNA的提取TRNA約占細胞內RNA的15的相對分子質量較小,在細胞破碎以后溶解在水溶液中,濾液用酸處理,調節到PH5得到的沉淀的中可分離得到TRAN。MRNA占細胞RNA的5左右,很不穩定,提取條件要嚴格控制。RRNA約占細胞內RNA的80,一般提取的RNA主要是RRNA。由于RNA是基因表達過程中非常重要的生物分子,如MRNA攜帶了DNA為蛋白質編碼的信息。RNA的分離是研究基因功能的重要基礎之一,在分子生物學中占有重要的地位。RNA的提取方法主要有稀鹽溶液提取和苯酚溶液提取。,稀鹽溶液提取將細胞破碎制成細胞勻漿,然后用014MOL/L的氯化鈉溶液反復抽提,得到核糖核蛋白提取液,再進一步與脫氧核糖核蛋白、蛋白質、多糖等分離,可得RNA。苯酚溶液提取在細胞破碎制成勻漿后,用SDS變性蛋白并抑制RNASE活性,經多次酚/氯仿在一定條件下振蕩一定時間,抽提除去蛋白、多糖、色素等后,用NAAC和乙醇沉淀RNA,將RNA與蛋白質分開。,4DNA的提取從細胞中提取DNA,一般在細胞破碎后用濃鹽法提取。即用1MOL/L的氯化鈉溶液從細胞勻漿中提取脫氧核糖核蛋白,再與含有少量辛醇或戊醇的氯仿一起振蕩除去蛋白質?;蛘呦纫?14MOL/L氯化鈉溶液也可用01MOL/L
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        上傳時間:2023-07-21
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      • 簡介:最新精品WORD歡迎下載可修改1SNRNA小核RNA,只存在于細胞核或者核質核仁中的一類小分子量的RNA,具有獨特功能并且獨立存在的實體,約為70300個核苷酸,可參與真核生物的RNA剪接。2SIRNA即干擾RNA,一類小分子量的RNA,可以高效,特意地阻斷體內同源基因的表達,促使同源MRNA降解,誘使細胞表現出特定的基因缺失。3核酶一類具有催化活性的核糖核酸,呈錘頭狀,參加RNA的剪切和降解。與RNA酶有顯著區別,它是RNA,后者是蛋白質。4反義RNA又稱調節RNA,是指能與特定MRNA互補結合的RNA片段,即堿基序列正好與有意義的MRNA互補的RNA分子。5三鏈DNA是在DNA雙螺旋結構基礎上形成的,由多聚嘧啶核苷酸或者多聚嘌呤核苷酸與DNA雙螺旋形成的。/由于雙螺旋的一股輕微折疊后,該股中的堿基可與雙螺旋的堿基以HOOGSTEEN氫鍵相連如TAT、CGC、TAA、CGG。6RNAI即RNAI干擾,SIRNA高效特異地阻斷體內同源基因表達,促使同源RNA降解,誘使細胞表現出特定基因缺失的表型的現象。7何謂反義RNA其功能和醫學意義如何答又稱為調節RNA,是指能與特定MRNA互補結合的RNA片段,也即堿基序列與有意義的MRNA互補的RNA分子。功能A阻斷MRNA的翻譯,B抑制DNA復制和MRNA的轉錄,C選擇性的關閉基因。意義參與基因調控可用于基因治療(病毒、腫瘤);8什么叫做核酶如何發揮作用有何應用價值答即一類具有催化活性的核糖核酸。主要催化RNA的剪接反應和剪切反應。應用意義通過設計合成特異性切割病毒以及病毒的RNA的核酶,對病毒和腫瘤的基因治療將發揮重要作用。9何謂RNAI其作用機理和應用前景如何答即RNAI干擾,SIRNA高效特異地阻斷體內同源基因表達,促使同源RNA降解,誘使細胞表現出特定基因缺失的表型的現象。作用機理分為起始階段和效應階段。起始階段DICER酶以依賴ATP的方式切割外源性的雙鏈RNA為小分子干擾RNA,清除病毒,阻斷轉座子表達;效應階段小分子干擾RNA結合核酶復合物形成RNA誘導活化的復合物及RISC,然后RISC結合至MRNA轉錄本上并切割它,從而發揮作用。應用前景大通量研究基因功能的工具;基因敲除中的應用;用于基因治療;基因表達的調控。第二章第二章1移動基因又叫轉位因子(TRANSPOSABLEELEMENTS),由于它可以在染色體基因組上移動,甚至可在不同染色體間躍遷,故又稱跳躍基因(JUMPINGGENE)。2斷裂基因真核細胞的結構基因,其核苷酸序列中含有與氨基酸編碼無關的DNA間隔區段,從而被分割成不連續的若干區域。將這種編碼序列不連續,有間隔區段的DNA片斷稱為斷裂基因3RNA剪接將斷裂基因的內含子刪除和表達子連接并最終形成成熟MRNA的過程。4重疊基因不同基因的核苷酸序列有時為相鄰兩個基因共用,將核苷酸彼此重疊的兩個基因稱為重疊基因。5假基因在珠蛋白基因簇各片段核苷酸序列分析時發現,除了有正常的功能基因之外,還有功能失活的特殊序列片段,它不能行使表達功能。該類核苷酸序列中存在的無表達功能的畸變核苷酸序列片段。6衛星DNA又稱隨體DNA,不編碼蛋白質和轉錄RNA的小片段高度重復一類小片段DNA序列,多富含GC堿基在DNA浮力密度實驗中會在主峰旁形成些小峰,形似衛星分布而稱之。一般510BP短序列,人類為171BP,保護和穩定染色體7基因組表示某物種單倍體的總DNA。對于二倍體高等生物其配子的DNA總和即為一組基因組不同生物基因組數目不同。8LTR即長末端重復序列,為RNA基因組的兩端含有的U3RU5兩個完全相同的正向重復序列。具隨機整和能力,可用作病毒載體問答1什么叫做基因何謂基因的新概念基因的主要功能是什么答基因就是指編碼有最新精品WORD歡迎下載可修改活性,可獨立存在與上游區、下游區或基因內部,可進行遠距離增強啟動作用,而且無方向性。問答1真核表達調控的順式作用元件有哪些其作用特點是什么答順式作用元件有啟動子,增強子,沉默子,衰減子,終止子。作用特點是能夠與DNA結合蛋白質結合的特定序列的DNA片段,決定轉錄起始位點和RNA聚合酶的轉錄效應。2真核表達調控的反式作用因子有哪些其作用特點答反式作用元件主要分為通用轉錄因子和轉錄調節因子兩大類。作用特點一,同一DNA序列可被不同蛋白質識別;二同一蛋白質因子可與多種不同DNA序列發生聯系,多通過蛋白質蛋白質先結合再影響DNA。三蛋白質蛋白質或蛋白質DNA的結合,導致構象上細微的改變,從而發揮調控作用。四反式作用元件在合成過程中有相當大的可變性和可塑性。4常用的真核表達載體有哪些并簡述其特點。答主要有一下幾種逆轉錄病毒載體,痘類病毒載體,HSVI單純皰疹病毒載體。特點一,逆轉錄病毒載體對細胞的感染效率高,并能表達整合的病毒基因;可以同時感染大量細胞;長時間感染細胞并不會發生毒害作用;宿主范圍十分廣泛;可以進行DNA的單拷貝整合;但穩定性差,安全性差,重組病毒滴度不高而且局限于感染分裂細胞。二,痘類病毒載體對多種細胞敏感易于培養利于大量生產制備;對外環境相對穩定并易于保存運輸;接種途徑簡單易行;利于多價疫苗的研究開發;利于大片段的外源性基因的插入,且不影響病毒的正常復制和表達,但是基因組分子量大不易操作,沒有MRNA的剪切功能故不宜采用基因組DNA,需使用無內含子的CDNA。三,HSVI單純皰疹病毒載體比較大利于大片段的外源性基因插入提供條件,而且插入容量大;可以感染神經細胞。5簡述真核,原核倆大表達系統的優缺點答一,真核生物DNA只有一小部分是裸露的,有核膜包裹;原核生物大部分屬于非結合狀態,且無核膜的阻隔,轉錄的MRNA直接在胞質中進行蛋白合成。二,真核生物DNA都有內含子,可以剪接加以去除;原核生物MRNA的剪接加工能力。三,真核生物可以在需要時可以重排某些DNA片段和擴增特定基因的機制,而原核生物沒有。四,真核生物有三種MRNA酶,可參與不同類型的RNA分子轉錄作用,而原核生物只有一種RNA酶。五,真核生物產生的MRNA分子壽命大多比原核生物長。六,真核生物具有對初級轉錄產物的剪接能力。七,真核生物不存在操縱子結構,原核生物多是。八,真核生物基因多拷貝,而原核生物含有很少的重復序列。第五章第五章名詞解釋1限制性核酸內切酶是一類能夠識別雙鏈DNA分子中的某種特定核苷酸序列,并由此切割DNA雙鏈結構的核酸內切酶。2同尾酶有一些限制性核酸內切酶識別的堿基順序不完全恒定,即識別順序不同,但酶切后產生同樣黏性末端的兩種酶稱為同尾酶,如BAMHⅠ和BGLⅡ。3同裂酶識別序列相同,對甲基化切點敏感性不同的兩種酶。如MBOⅠ和SAU3AⅠ共同識別序列GATC,但對GMEATC切點,前者不能切,后者能切。4甲基化酶常見的有DAM甲基化酶和DCM甲基化酶,可使相應堿基甲基化。常用于使酶切位點中的堿基甲基化而避免降解,保護酶切位點。5KLENOW酶為DNA聚合酶Ⅰ大片段,分子質量為76KD,是經過枯草桿菌蛋白酶或胰蛋白酶分解DNA聚合酶Ⅰ,切除小亞基,保留的大亞基部分。這種酶只有DNA聚合酶的活性和3/外切酶的活性,但是沒有5/外切酶活性。6堿性磷酸酶該酶的功能是以單鏈或雙鏈的DNA、RNA為基質,將DAN或RNA片段的5’端的磷酸切除,產生5’OH7逆轉錄酶又稱為依賴RNA的DNA聚合酶,可以RNA為模板,逆轉錄成CDNA第一鏈,這種酶具有聚合酶活性和3’外切酶活性。8DNA連接酶LIGASE)是一種能夠催化在雙股DNA鏈的3′OH和5′P之間形成磷酸二酯鍵的酶,可連接互補粘性末端或平端以及缺口修復,不能連接單鏈DNA,被連接的DNA鏈必須是雙螺旋DNA分子的一部分。
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      • 簡介:最新精品WORD歡迎下載可修改分子生物學知識點(修改)分子生物學知識點(修改)染色體與染色體與DNADNA▲基因基因DNA分子中含有特定遺傳信息的一段核苷酸序列,是遺傳物質最小的功能單位?!虻姆肿由飳W定義基因的分子生物學定義產生一條多肽鏈或功能RNA所必需的全部核苷酸序列▲基因組基因組單倍體細胞中含有的整套染色體?!旧w染色體細胞在有絲分裂(或減數分裂)時遺傳物質存在的特定形式,是間期細胞染色質結構緊密組裝的結果?!旧w組成DNA、組蛋白、非組蛋白、部分RNA▲染色體的特征1、分子結構相對穩定2、能夠自我復制,使親子代之間保持連續性3、能夠指導蛋白質的合成,掌握整個生命過程4、可以產生可遺傳的變異▲組蛋白組蛋白與DNA結合但沒有序列特異性的蛋白,是染色體的結構蛋白,與DNA共同組成真核生物染色質的基本結構單位核小體▲組蛋白的特性1、進化上保守,不同生物組蛋白的氨基酸組成和相似2、無組織特異性3、肽鏈上氨基酸分布不對稱4、組蛋白有修飾作用▲非組蛋白非組蛋白與DNA結合但有序列特異性的蛋白▲非組蛋白的特性1、具有多樣性和異質性,不同組織細胞中其種類和數量都不相同2、具有識別、結合特異性,能夠識別特異的DNA序列,在不同的基因組之間,這些非組識別的DNA序列在進化上是保守的3、具有功能的多樣性,包括基因表達的調控和協助染色質高級結構的形成★真核與原核生物基因組的區別★真核與原核生物基因組的區別原核生物基因組真核生物基因組結構簡單,幾乎所有基因都用來編碼蛋白質結構龐大,存在大量重復序列和非編碼序列功能相關的RNA和蛋白質基因,往往集中在一起形成功能或轉錄單位,可以一起被轉錄為多個MRNA(多順反子MRNA)基因的轉錄產物為單順反子有重疊基因(完全重疊、部分重疊、只有一個堿基對的重疊)基因分布在一個染色體上基因分布在多個染色體上幾乎每一個基因都是完整的連續的DNA片段基因是不連續的,中間存在不被翻譯的內含子序列基因轉錄和翻譯是同步的基因組轉錄后的絕大部分前體RNA必須經過剪接過程才能形成成熟的MRNA原核生物的基因組一般是一個復制子基因組的復制起點多,缺少明顯的操縱最新精品WORD歡迎下載可修改有關),拓撲異構酶II(切斷雙鏈,作用是將負超螺旋引入DNA分子,同復制有關)?!艚庑甘墙忾_雙鏈的酶蛋白,每解開1對堿基,需要消耗2分子ATP?!魡捂溄Y合蛋白(SSB)是一些能夠和單鏈DNA結合的蛋白質因子,用于穩定DNA單鏈,保護單鏈DNA,避免核酸酶的降解?!粢l酶參與構成引發體,合成RNA引物,提供復制所需要的3’OH端,引發體由引發酶和引發前體組成?!鬌NA聚合酶需DNDP為原料,MG2激活,需模板和3’OH端引物?!鬌NA連接酶催化兩段DNA之間磷酸二酯鍵的形成,但不能將兩條游離的單鏈連接起來◆DNA復制的過程起始(DNA母鏈形成復制叉,DNA合成從復制起始點出沿著兩個方向進行,和RNA引物形成的階段)。延長(復制叉的移動和新生鏈的延長,包括前導鏈和后隨鏈的延長)。終止(新生子鏈和母鏈形成新生的雙鏈DNA)▲原核生物DNA聚合酶◆DNA聚合酶I5’3’的聚合酶活性,3’5’,5’3’外切酶活性,在切除因紫外線照射而形成嘧啶二聚體中有重要作用,也可用來切除岡崎片段5’端的RNA引物,使岡崎片段間缺口消失,保障連接酶的連接?!鬌NA聚合酶II5’3’的聚合酶活性,3’5’外切酶活性,主要是起修復DNA的作用?!鬌NA聚合酶III5’3’的聚合酶活性,3’5’外切酶活性提高復制的保真性,是DNA復制中鏈延長的主導聚合酶?!婧松顳NA聚合酶◆DNA聚合酶?。ǚ植荚诤藘?,主要作用是引物合成)◆DNA聚合酶Β(分布在核內,主要起對損傷的修復,屬高忠實性修復酶)◆DNA聚合酶Γ(分布在線粒體內,對線粒體DNA的復制發揮作用)◆DNA聚合酶Δ(分布在核內,主要負責DNA復制的酶,參與前導和后隨鏈的合成)◆DNA聚合酶Ε(分布在核內,與后隨鏈的合成有關)▲DNA的復制體系DNDP為原料,DNA的兩條鏈為模板鏈,一段RNA引物,引物酶,聚合酶等多種酶?!鳧NA的復制的幾種方式◆線性DNA復制(主要是真核生物)◆環狀DNA復制(大腸桿菌Θ型,質粒滾環型(不需要RNA引物,只有一個復制叉),線粒體D型)★真核與原核生物★真核與原核生物DNADNA復制的比較復制的比較相同點1、都以DNTP為底物,需要MG激活,需要能量2、聚合時需要模板和引物,都為半保留、半不連續復制3、方向為5’3’不斷延長的是3’OH4、復制為高保真、有多種機制不同點真核生物原核生物多復制子,多復制起點,雙向為主也有單向單個復制子,單個復制起點,雙向一個復制單元一個復制叉,復制叉移動慢一個復制單元有多個復制叉,復制叉移動快DNA聚合酶種類較多,有15種以上DNA聚合酶種類相對較少DNA復制需要起始點識別復合物不需要
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      • 簡介:最新精品WORD歡迎下載可修改第二章DNA的結構一、選擇題單選或多選1.證明DNA是遺傳物質的兩個關鍵性實驗是肺炎球菌在老鼠體內的毒性和T2噬菌體感染大腸桿菌。這兩個實驗中主要的論點證據是A從被感染的生物體內重新分離得到DNA,作為疾病的致病劑BDNA突變導致毒性喪失C生物體吸收的外源DNA而并非蛋白質改變了其遺傳潛能DDNA是不能在生物體間轉移的,因此它一定是一種非常保守的分子E真核生物、原核生物、病毒的DNA能相互混合并彼此替代21953年WATSON和CRICK提出A多核苷酸DNA鏈通過氫鍵連接成一個雙螺旋BDNA的復制是半保留的,常常形成親本子代雙螺旋雜合鏈C三個連續的核苛酸代表一個遺傳密碼D遺傳物質通常是DNA而非RNAE分離到回復突變體證明這一突變并非是一個缺失突變3雙鏈DNA中的堿基對有AAUBGTCCGDTAECA4DNA雙螺旋的解鏈或變性打斷了互補堿基間的氫鍵,并因此改變了它們的光吸收特性。以下哪些是對DNA的解鏈溫度的正確描述A哺乳動物DNA約為450C,因此發燒時體溫高于420C是十分危險的B依賴于AT含量,因為AT含量越高則雙鏈分開所需要的能量越少C是雙鏈DNA中兩條單鏈分開過程中溫度變化范圍的中間值D可通過堿基在260MM的特征吸收峰的改變來確定E就是單鏈發生斷裂磷酸二醋鍵斷裂時的溫度5DNA的變性A包括雙螺旋的解鏈B可以由低溫產生C是可逆的D是磷酸二醋鍵的斷裂E包括氫鍵的斷裂6在類似RNA這樣的單鏈核酸所表現出的“二級結構“中,發夾結構的形成A基于各個片段間的互補,形成反向平行雙螺旋B依賴于AU含量,因為形成的氫鍵越少則發生堿基配對所需的能量也越少C僅僅當兩配對區段中所有的堿基均互補時才會發生D同樣包括有像GU這樣的不規則堿基配對E允許存在幾個只有提供過量的自由能才能形成堿基對的堿基7.DNA分子中的超螺旋A僅發生于環狀DNA中。如果雙螺旋在圍繞其自身的軸纏繞后即增加纏繞數才閉合,則雙螺旋在扭轉力的作用下,處于靜止B在線性和環狀DNA中均有發生。纏繞數的增加可被堿基配對的改變和氫鍵的增加所抑制C可在一個閉合的DNA分子中形成一個左手雙螺旋。負超螺旋是DNA修飾的前提,為酶接觸DNA提供了條件D足真核生物DNA有絲分裂過程中固縮的原因E是雙螺旋中一條鏈繞另一條鏈的旋轉數和雙螺旋軸的回轉數的總和8DNA在10MM纖絲中壓縮多少倍長度A6倍B10倍C40倍D240倍E1000倍F10000倍9DNA在3MM纖絲中壓縮多少倍A6倍BL0倍C40倍D240倍ELO00倍F10000倍10DNA在染色體的常染色質區壓縮多少倍A6倍B10惜C40倍D240倍E1000倍F10000倍11DNA在中期染色體中壓縮多少倍A6倍B10倍C40倍D240倍E1000倍F10000倍12組蛋白的凈電荷是A正B中性C負13.核小體的電性是A正B中性C負最新精品WORD歡迎下載可修改一選擇題1基因組是“A一個生物體內所有基因的分子總量(B)一個二倍體細胞中的染色體數C遺傳單位D生物體的一個特定細胞內所有基因的分子的總量2多態性可通過表型或DNA分析檢測到是指A在一個單克隆的純化菌落培養物中存在不同的等位基因B個物種種群中存在至少兩個不同的等位基因C個物種種群中存在至少三個不同的等位基因D一個基因影響了一種表型的兩個或更多非相關方面的情況E一個細胞含有的兩套以上的單倍體基因組3.核基因經常被斷開“A反映了真核生物的MRNA是多順反子B因為編碼序列“外顯子“被非編碼序列“內含子“所分隔C因為真核生物的DNA為線性而且被分開在各個染色體上,所以同一個基因的不同部分可能分布于不同的染色體上D表明初始轉錄產物必須被加工后才可被翻譯E表明真核基因可能有多種表達產物,因為它有可能在MRNA加工的過程中采用不同的外顯子重組方式4下面敘述哪些是正確的AC值與生物體的形態復雜性呈正相關BC值與生物體的形態復雜性呈負相關C每個門的最小C值與生物體形態復雜性是大致相關的5選出下列所有正確的敘述。A外顯子以相同順序存在于基因組和CDNA中B內含子經??梢员环gC人體內所有的細胞具有相同的一套基因D人體內所有的細胞表達相同的一套基因E人體內所有的細胞以相同的一種方式剪接每個基因的MRNA6下列關于酵母和哺乳動物的陳述哪些是正確的A大多數酵母基因沒有內含子,而大多數哺乳動物基因有許多內含子B酵母基因組的大部分基因比哺乳動物基因組的大部分基因小C大多數酵母蛋白比哺乳動物相應的蛋白小D盡管酵母基因比哺乳動物基因小,但大多數酵母蛋白與哺乳動物相應的蛋白大小大致相同7下列哪些基因組特性隨生物的復雜程度增加而上升A基因組大小B基因數量C基因組中基因的密度D單個基因的平均大小8以下關于假基因的陳述哪些是正確的A它們含有終止子B它們不被轉錄C它們不被翻譯D它們可能因上述任一種原因而失活E它們會由于缺失或其他機理最終從基因組中消失F它們能進化為具有不同功能的新基因9假基因是由于不均等交換后,其中一個拷貝失活導致的。選出下面關于此過程的正確敘述。A失活點可通過比較沉默位點變化的數量和置換位點變化的數量來確定B如果假基因是在基因復制后立即失活,則它在置換位點比沉默位點有更多的變化C如果假基因是在基因復制后經過相當長一段時間才失活,則它在置換位點與沉默位點有相同數量的變化10下列哪些基因以典型的串聯形式存在于真核生物基因組A球蛋白基因B組蛋白基因CRRNA基因D肌動蛋白基因11根據外顯子改組EXONSHUFFLING假說A蛋白的功能性結構域由單個外顯子編碼
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      • 簡介:最新精品WORD歡迎下載可修改一、一、簡述DNA二級結級結構的特點構的特點雙螺旋雙螺旋DNA兩條核苷酸兩條核苷酸鏈反向平行,以一定平行距離反向平行,以一定平行距離繞一個軸盤軸盤旋,形成一個右旋的雙螺旋體。旋,形成一個右旋的雙螺旋體。主鏈磷酸和核苷酸排列在雙螺旋外磷酸和核苷酸排列在雙螺旋外側,彼此通,彼此通過35磷酸二磷酸二脂鍵相連接,形成主接,形成主鏈。堿基配堿基配對兩條主兩條主鏈相對應對應的堿基按照的堿基按照AT和GC的配的配對原則由氫鍵氫鍵相連,其中,其中AT之間由兩個由兩個氫鍵氫鍵相連,GC之間由三個由三個氫鍵氫鍵相連。主。主鏈上堿基排列上堿基排列順序儲藏了藏了遺傳遺傳密碼信息。信息。結構尺寸和大小溝構尺寸和大小溝DNA雙螺旋分子直徑雙螺旋分子直徑為2NM,螺距,螺距為34NM,其中包括,其中包括10個堿基個堿基對,堿基與堿基之,堿基與堿基之間距離距離為034NM。螺旋外部有兩個凹槽,根據大小分螺旋外部有兩個凹槽,根據大小分為大小溝,都能使蛋白大小溝,都能使蛋白質分子分子進入而與堿基相接觸。入而與堿基相接觸。二、核酸的二、核酸的變性DNA二級結級結構和三構和三級結級結構受到物理化學因素的破壞而解體,構受到物理化學因素的破壞而解體,但其一但其一級結級結構核苷酸構核苷酸間共價共價鍵并不斷裂。并不斷裂。DNA分子由分子由穩定的雙螺旋定的雙螺旋結構松解構松解為無規則線規則線性結構的構的現象。象。變性時維時維持雙螺旋持雙螺旋穩定性的定性的氫鍵氫鍵斷裂,堿基斷裂,堿基間的堆的堆積力遭到破力遭到破壞,但不涉及到其一壞,但不涉及到其一級結級結構的改構的改變。凡能破壞雙螺旋。凡能破壞雙螺旋穩定性的因定性的因素,如加素,如加熱、極端的、極端的PH、有機、有機試劑試劑甲醇、乙醇、尿素及甲甲醇、乙醇、尿素及甲酰胺等,胺等,最新精品WORD歡迎下載可修改DNA損傷損傷又稱前突又稱前突變,如果,如果細胞不能將胞不能將損傷損傷完全修復,完全修復,DNA不能恢復不能恢復損傷損傷前的前的結果形果形態,就形成不可逆的永久性、可,就形成不可逆的永久性、可遺傳遺傳的改的改變,即,即發生了基因突生了基因突變。因此三者之因此三者之間的關系是,的關系是,DNA損傷損傷是突是突變的基的基礎,而修復,而修復時阻止阻止損傷變損傷變成突成突變的手段,突的手段,突變時損傷變時損傷無法修復造成的后果。無法修復造成的后果。六、六、DNA損傷損傷主要的修復方式主要的修復方式DNA修復可以在三個水平上修復可以在三個水平上進行行1、DNA復制前水平或非復制復制前水平或非復制DNA的修復如回復修復和切的修復如回復修復和切除修復。除修復?;貜托迯桶ɑ貜托迯桶笇W光修復(修復學光修復(修復嘧啶嘧啶二聚體),二聚體),單鏈單鏈斷裂重斷裂重組(連接缺口接缺口5磷酸根和磷酸根和3羥基形成磷酸二基形成磷酸二酯鍵酯鍵),),嘌呤直接插入(修呤直接插入(修復無復無嘌呤位點)。切除修復包括堿基切除修復和核苷酸切除修復。呤位點)。切除修復包括堿基切除修復和核苷酸切除修復。步驟為識別驟為識別、切除、修、切除、修補、連接。接。DNA復制水平的修復,如復制水平的修復,如錯配修復。配修復。錯配修復將配修復將DNA復制復制過程中未得到校正的程中未得到校正的錯配堿基配堿基進行二行二次校正。次校正。DNA復制水平后的修復,如重復制水平后的修復,如重組修復及修復及SOS修復。修復。重組修復利用含有正常修復利用含有正常遺傳遺傳信息的同源姐妹信息的同源姐妹DNA分子分子進行重組修復。修復。這種修復常種修復常發生在修復后,可以生在修復后,可以對發對發生在生在DNA兩條兩條鏈
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      • 簡介:綄氜?耀睭???幣〉Ц??睶ヅ礞????奲賋??????魹??鉘??蚶????????囍奧鵁?娕???紐?咯捗?腰?賉蟊??冺?栭仹諸湷?憌????業???臲翐葵尷?罻??綞??航得剒?嚯???栞?┤????儋??軸??羼羍姙?軖?篠虇嫛???轂??廓?????位?召??袎謙????????媤??鶛蹧?賎????罬快????酛?帳刯?湍????袋????笎?漅????彍殐???魮??????????鸜?杯葬?薖?葥?扻?鶈??涬??徛?蔥癹礷???蜞瀚??平??熒嘙??碷?O牤??閠?儼????欽猿???榋?檂?徖?訚葒蠈招靎?妍?ǘ欫?轤????㏕??锫夬???蹗跴?襖????騫伐圐蛛??睟飩?攬??皦蛫?猢騖袋???翈??嗏?禥昸?飹?否鶆諣??窵析???嗕??????鰅?華?蓋鶳親???焆?樂匿誚褻鞦肵?棘???袕??弩?欲勭????摔幭?般???鉱幫???呃孖?人????譾餓?鉍瓎??鹟遹鍥???淴???譈????歁?朗??????鶧畊?單戥敄??婱?韴?芘邏?氠?鍴鬩????????四??排觳洭?嚌???匸馢質????哅?頨??王糊?襖??毳戎辵檜???????塷琽餚鮫箇?嶄蠁?轄放???伳???瞥?犎??擾?慄菥???鄋??滾??炲憞??4??鲾??蚓?宣?筂雽????晗??廠?瞿???嫲嘳樆?黬?鲴???諶??喪???彲諮┐???桎????莙????﹨籷???妙????邒銌??蘌懟緈????瞡萃省????傺廛??莛??憯??悛?硫?奐寈芚??榰潮鄼?谼蚳????蕜???轓???馚?榪????崎?潡???狆檍ぬ●醝??櫧??忿躋?褉畼Μ幚璉?????紖?荃??倀????鼀省牯牟汥潤畣敭瑮砮汭爮汥??葬?遝??厴?窗??浼?菨歧?????昋???儶涷滰????㈧?醝?6鑪??董?プ?綳??瑤??挌?馀?鎩敷?た嚢???僚???煡?彉駢??跶???鰾???芲鯴???湙侉?籫镥??歐珍芪??鸆??嫓淮??葲?緡???擄∥??????梂??窞?????衱╳?懍痙???免∪???袙鬢?だ濱?鍟?????挬?摍??呻裘?荑楨玡?愁?觴┤鮫?????濼?家⒌?塵???髷??瀙???峁荙歭肊???汳?立摲搯捯浵湥浸???倿佼各???寬寫??顠???騱覨馷??梊??灘???蠠齏???罟麘劈盳?鍦癆峺?翳緾??????罻??霎?荺?鴯櫧ぷ矨?鰄拝誑???隣?????燭鼇?妻?懗問?覽????盥慠纜鯹?決?????麵孊????鴿???鉜?蝡鉼鳹??說?墥刂?????虨?淞??鏘怞?竧?卾?瑘??汘噭?紗癱????爓粻澡????楨厯??蓋巀???纑燧嘵浬蕀莐???蔐????皭繢?????鉃揮?筶?脛?隵?櫛億?攧?寙淭茖?徯鍯嚦蹃????????????冽亳?橚韖?責??扴?????閔?致轅謕??鮟?縘М?椄摦蚑闟??裰?鴢尅???????馇?哧?徐???拍躔膭???縿憪?僥??繋樑??牑帉?蒦??????寸?柹挈獙??瞗懻??劕ヌ鳹﨏??嗑瞼?????翈烺??鈔??灻?題???藀?泣鍘輚爋???嬯隨蒎諏敵慪???廚?妭欵鼵???磛??????纎帳脙磘?????氨爾???曞????棿??痶茐?織???阫魹?偉挩涑攨?晊帆覠蛌骦??癒鉡????嗆賈?耎?唜亖?寽舲鯁???玌蜅椌??霡??熌懯??娩鞇??講??躆?梙?樍徂訛?鉍枹禙芭??????員暈妭涏?猉躵?褌位鬨??甕?????餑?撲?疾??糲?????匟蕢贅???鱣??K砸??殜??????箏??襧??穤胖克?椔溧???嚈??鶿鶧?偲?蕕?跖??汝???O?耢鶁??暀??惲虧??賊?柩??囥薻?什駠?賀?怞?詨??≥瀓?陳?????寰?嗊??垬??匫悻霪?麕?║??筘???礀?遪?????讉季?彊?貥????ヽ付基????榪??峱錘锽?饉???謝?匝?嗩??淕???恅禿七?Μ?讚??丒??魭?????稱?俤儕???刌吘??????壩?呰?媽鏢?蛬???虦攌鋔溚?鑰蕩??塵??勁???捬梙蠺?覔?雽綐?愾?鑃?刦?癟????澋?喆?????酖觷?????禮?適??儭瘜銼嘩簓??嚙鰼彽玈?????潿漿貥?????漹??嫀??訵?粵琠憁?除蹽?賂擵???苜瓜?????呔女卉?潈,?筕?栦??鐧??諑???唵??牠尚明?????阦?餓??焴數撣?麌?媎鰰?馷檁?????嚂?槒惡禡??勞???賴茖??恁隭?锳?伅寷漳??畮凮??墎?薃撙?劏??烉??鍙蠃?猔箠薠?崊?鵭?織???徹??煟漷?铚磷??俾?諀?擝?鮯?????擐???咝?執??駲窷??府囪萷??鯝絹?定?????罟????睛強?賦??祭?潚媖溏嶾?稅晏馼?縐胗??彟???巛??妝癯禮?甘翖?喙老榽淸?竚棓?峑??槭??綰櫨獊臾?汜舭à琕???確??滭燐鰒?悂澶??瞧謁???敘?頏禡?燒?????撏嶧櫖??勨?㈧???????曹?拀?魲媌趔??倂ゞ茩縧??讖石?荬?蜖??鷻??????椥??侁??硺?珠後瓅?溷懅胹┕?????飺????彆?別?蘇???摯萣??勍傐?烶奣瀞?譂冔??蠡酳??蕭誚?鵇詈易??????偤魙攄?恕甌??憼?姴???嗭?慴鷯???釅啋瞛???栩??魗?????????鰀???簊?????鉠??潷摲是潯湴瑯獥砮汭銬櫛ッ蘌蝻????竬鸀??汥大統燊壇熻撈??啃?鎬厠?霡郺?螗雅?鴳??涼?滋鉯?聜???勱悖???????灙虐涼?邇戲┠?裱??坼???哏?毀?稕楊?罓憥椄??髗????壜?谹蟮????衶????挽餸?▼輎???澂綑趠????撆銞?霏纘??尻?K藘?????晴?柙熍廐?鱟叧?鬿??瘰??????充??潷摲栯慥敤?砮汭埬滍???椻??????汮儈??宑淡烚??誒?嚜??曹??鵋??倏蠟僰鑄?冓辮洜輰??銬瑨???膟ㄣ渚蓃???壎蘨?憗糵嬢悡?橓溦?騁?╃袴??咐??蜣鰢????舎蓫嵊??所荒攝?????峭????鴬戍寇巔??イ姏?諜諞?????債蒿〆?緉?凨??惶????捑鈜優獒?腓嘼???箄?柖浡?ê棜?Δ??瞗??恕??奎??峒霧?禆???
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